2015-2016高中生物专题53血红蛋白的提取和分离课件新人教版选修1课程.ppt

生物选修1（人教版） 专题5　DNA和蛋白质技术　　　　　　　　　　　　 　　　　　 课题3　血红蛋白的提取和分离 要点突破 一、血红蛋白的提取和分离的原理 1．蛋白质分子在凝胶中的运动情况分析 2.电泳原理及方法 电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程。许多重要的分子，如氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等都具有可解离基团，它们在某个特定的pH中会带上正电或负电；在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极方向移动。电泳技术就是在电场的作用下，利用待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异，使带电分子产生不同的迁移速度，从而达到对样品进行分离、鉴定或提纯的目的。 例1　关于电泳的说法不正确的是(　　) A．电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程 B．带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动 C．蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带净电荷的多少 D．用SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳，蛋白质的电泳迁移率完全取决于分子的大小 解析：蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带净电荷的多少以及分子的大小等因素。SDS能与各种蛋白质形成蛋白质－SDS复合物，SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子原有的电荷量，因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷差异，使电泳迁移率完全取决于分子的大小。 答案：C ?变式训练 1．凝胶色谱法分离蛋白质的原理依据是( ) A．根据蛋白质分子与凝胶的亲和力的大小 B．根据蛋白质相对分子质量的大小 C．根据蛋白所带电荷的多少 D．根据蛋白质溶解度的大小 解析：凝胶色谱法是根据蛋白质相对分子质量的大小分离蛋白质的一种方法。 答案：B 二、血红蛋白的提取和分离的实验操作 1．样品处理 (1)红细胞的洗涤：洗涤红细胞的目的是去除杂蛋白。采用低速短时间离心，吸出上层透明的黄色血浆，再加入五倍体积的生理盐水，重复洗涤三次，直至上清液中没有黄色，表明红细胞已洗涤干净。洗涤次数过少，无法去除血浆蛋白；离心速度过高和时间过长会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，达不到分离的效果。 (2)血红蛋白的释放：红细胞在蒸馏水和甲苯的作用下破裂，释放出血红蛋白。 (3)分离血红蛋白溶液：将混合液进行离心后，会明显看到试管中的溶液的分层情况：第3层的红色透明液体是血红蛋白的水溶液。 (4)透析：目的是除去样品中的相对分子质量较小的杂质。 2．凝胶色谱操作 (1)凝胶色谱柱的装填： ①装填前，凝胶用蒸馏水或者洗脱液充分溶胀。 ②凝胶装填要均匀，色谱柱内不能有气泡，一旦发现存在气泡，必须重装。 ③装填完后，立即用300 mL 20 mmol/L磷酸缓冲液充分洗涤平衡凝胶，使凝胶装填紧密。 (2)样品的加入和洗脱： ①加样前，打开色谱柱下端的流出口，使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到与凝胶面平齐，关闭出口。 ②按正确方法加样，不能破坏凝胶面。 ③进行洗脱时，等红色蛋白质接近色谱柱底端时，采用试管收集。 例2 －聚丙烯酰胺凝胶电泳法中加入SDS的作用是(　　) A．增大蛋白质的相对分子质量 B．改变蛋白质分子的形状 C．掩盖不同蛋白质分子间的电荷差别 D．减少蛋白质分子的相对分子质量 解析：SDS是阴离子去污剂，作为变性剂和助溶试剂，它能断裂分子内和分子间的氢键，使分子去折叠，破坏蛋白质分子的二、三级结构。在样品和凝胶中加入还原剂SDS后，分子被解聚成多肽链，解聚后的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白－SDS复合物，SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子原有的电荷量，这样就消除了不同分子间的电荷差异，使电泳迁移率完全取决于分子的大小。 答案：C ?变式训练 2．在利用凝胶电泳法分离蛋白质时，一定要加入缓冲溶液，起到的作用是( ) A．使酶的活性最高　　　 B．使蛋白质的活性最高 C．维持蛋白质所带电荷　 D．使蛋白质带上电荷 解析：加缓冲液的目的是维持蛋白质所带电荷不发生改变，而不是使蛋白质带上电荷。 答案：C 本节小结 核心归纳 1．凝胶色谱法分离蛋白质取决于相对分子质量的大小，相对分子质量大的路程较短，移动速度快；相对分子质量较小的，路程较长，移动速度慢。 2．缓冲液能在一定范围内抵制外界酸、碱对溶液pH的影响，维持pH基本不变。 3．电泳时，带电分子会向其所带电荷相反的电极移动。 4．蛋白质的提取和分离一般分为四步：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。 5．血红蛋白溶液离心后分为四层，从上到下依次为：无色透明的甲苯层、白色薄层固体(脂溶性物质的沉淀层)、红色透明液体(血红蛋白的水溶液)和其他杂质的暗红色沉淀物。