1.1DNA重组技术的基本工具程序.ppt

载体DNA必需有一个或多个限制酶的切割位点，以便目的基因可以插入到载体上去。这些供目的基因插入的限制酶的切点所处的位置，还必须是在质粒本身需要的基因片段之外，这样才不至于因目的基因的插入而失活。 最常用的质粒是大肠杆菌的质粒，其中常含有抗药基因，如抗四环素的标记基因。质粒的存在与否对宿主细胞生存没有决定性作用，但复制只能在宿主细胞内完成。 * 专题1-1DNA重组技术的工具 学习目标： 1、了解基因工程的概念 2、掌握基因工程操作工具的种类、特点、功能 基因工程的概念 1、概念：基因工程又叫做基因拼接技术或DNA重组技术。 通俗的说就是按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向的改造生物的性状。 2、DNA 重组技术的基本工具 “分子手术刀” ──限制酶 “分子缝合针” ──DNA连接酶 “分子运输车” ──运载体 自学指导：回答下列问题 1、了解基因工程的概念 2、掌握基因工程操作工具的种类、特点、功能 1：科学家们经过多年的努力，创立了 一种新兴生物技术——基因工程，实施该 工程的最终目的是 A. 定向提取生物体的DNA分子　　　　　 B. 定向地对DNA分子进行人工“剪切” C. 在生物体外对DNA分子进行改造　　　 D. 定向地改造生物的遗传性状 D 跟踪训练 使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开（切割DNA分子） 原核生物（微生物） 1、来源： 3、作用： 4、结果： 形成两种末端 一 、“分子手术刀” ——限制性核酸内切酶 黏性末端 平末端 2、特点：具有专一性 一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列并且能在特定的切点上切割DNA分子 ①黏性末端 被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 限制酶 ②平末端 当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。 2.下列有关基因工程中限制酶的描述，错误的是 A.一种限制酶只能识别一种特定的脱氧苷酸序列 B.限制酶的活性受温度的影响 C.限制酶能识别和切割RNA D.限制酶可从原核生物中提取 C 跟踪训练 3、同一种限制酶切割成的黏性末端是 A. ①② B. ①③ C. ①④ D. ②③ A 如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？ 会产生相同的黏性(平)末端，然后让两者的黏性(平)末端黏合起来，就似乎可以合成重组的DNA分子了。 思考? 二、“分子缝合针”——DNA连接酶 1、作用: 把切下来的DNA片段拼接成新的DNA，即将脱氧核糖和磷酸连接起来. 2、作用原理： 催化磷酸二酯键形成 3、类型： 类型 E·coliDNA连接酶 T4DNA连接酶 来源 功能 大肠杆菌 T4噬菌体 恢复 磷酸 二酯键 只能连接黏性末端 能连接黏性末端和平末端(效率较低) 相同点 差别 可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来， E·coli DNA连接酶　　　　　　　　或T4DNA连接酶 即恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键 　 T4DNA连接酶 DNA聚合酶 DNA连接酶 区别 相同点 寻根问底 DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗?为什么? 只能将单个核苷酸连接到已有的DNA片段上，形成磷酸二酯键 形成磷酸二酯键 在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键 4、据右图所示，有关工具酶功能的叙述不正确的是（　 ） A. 限制性内切酶可以切断a处，DNA连接酶可以连接a处 B. DNA聚合酶可以连接a处 C. 解旋酶可以使b处解开 D. 连接C处的酶可以为DNA连接酶 D 跟踪训练 三、“分子运输车” ——基因进入受体细胞的载体 1、作用：将目的基因导入受体细胞 2、常用运载体：质粒 动植物病毒 噬菌体 3、特点： （1）能够在宿主细胞中复制并稳定地保存 （2）具一种或多种限制酶的切割位点，以便与外源基因连接 （3）具有某种标记基因，便于进行筛选 运载体：常用质粒 质粒特点： 1、质粒结构简单，大小适中 2、能自我复制并在受体细胞中稳定存在 3、有一个或多个限制酶切点 4、有特殊的遗传标记基因 注意：真正用作运载体的质粒都是人工改造过的。