溶血的检验要点.pptVIP

溶血的检验  酸化血清溶血试验 一、原理：酸化血清溶血试验，也称Hamtest。阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）患者体内存在对补体敏感的红细胞，即红细胞在酸性（pH6.4～6.5）的正常血清中孵育，补体被激活，PNH红细胞破坏而产生溶血。而正常红细胞不被溶解，无溶血现象。如血清经56℃加热30分钟，使补体灭活，患者红细胞即不被溶解。 二、参考范围：健康人：阴性。 三、临床意义：阳性主要见于PNH，敏感度较低，有30%以上患者呈阴性反应。自身免疫性溶血性贫血发作严重时可呈阳性。 蔗糖溶血试验 一、原理：根据PNH患者的红细胞，在低离子强度的蔗糖溶液中对补体敏感性增强，经孵育后可使补体与红细胞膜结合加强，蔗糖溶液进入补体敏感的红细胞内，导致渗透性溶血。 二、参考值：定性试验：正常为阴性；定量试验：正常溶血率5%. 三、临床意义： PNH患者为阳性或溶血率增加，可作为PNH的筛选试验。部分自身免疫性溶血性贫血患者可为阳性，白血病、骨髓硬化时可出现假阳性。 抗人球蛋白试验 一、原理：抗人球蛋白试验（Coombs试验）检测自身免疫性溶血性贫血的自身抗体（IgG）。分为检测红细胞表面有无不完全抗体的直接抗人球蛋白试验（DAGT）和检测血清中有无不完全抗体的间接抗人球蛋白试验（IAGT）。直接试验应用抗人球蛋白试剂（抗IgG、IgM、IgA和（或）抗C3）与红细胞表面的IgG分子结合，如果红细胞表面存在自身抗体，出现凝集反应。目的是检查红细胞表面的不完全抗体。间接试验应用Rh(D)阳性O型红细胞与受检血清混合孵育，如血清中存在不完全抗体，红细胞致敏，再加入抗人球蛋白血清，可出现凝集。 二、参考范围：健康人直接和间接抗人球蛋白试验均阴性。 三、临床意义： 自身免疫性溶血性贫血、新生儿同种免疫性溶血和血型不合引起的输血反应、药物性免疫性溶血、冷凝集素综合征、阵发性冷性血红蛋白尿等直接抗人球蛋白试验阳性，当抗体与红细胞结合后，有过剩抗体时直接和间接试验均阳性。 红细胞寿命测定 原理：红细胞寿命测定将标记放射性核素的红细胞注入血循环后，逐日观察其消失率，记录成活曲线，计算出红细胞寿命。 参考范围：半寿期25-32天 应用评价： 1.溶血性贫血：红细胞寿命缩短，约为14天。 2.再生障碍性贫血：红细胞寿命缩短，约为15-29天。 血浆游离血红蛋白检测 原理：血红蛋白可催化过氧化氢释放新生态氧，使邻苯氧化为蓝紫色。根据显色深浅，与同时测定标准血红蛋白液对照，可测出血浆游离血红蛋白的量。 参考范围：0-40mg/L 应用评价： 1.明显增高是判断血管内溶血的指征。蚕豆病、PNH、冷凝集素综合征、阵发性寒冷性血红蛋白尿、溶血性输血反应等明显增高；自身免疫性溶血性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血可轻到中度增高。 2.血管外溶血、红细胞膜缺陷不增高。 血清结合珠蛋白检测 原理：血清结合珠蛋白检测（Hp）是在待测血清中加入一定量的血红蛋白液，使之与待测血清中的结合珠蛋白形成Hp-Hb复合物。通过电泳法将结合的Hp-Hb复合物与未结合的Hb分开，测定Hp-Hb复合物的量，可测得血清中结合珠蛋白的含量。 参考范围：0.5-1.5gHb/L 应用评价：1.减低：常见于各种溶血，尤其是血管内溶血。严重肝病、先天性无珠蛋白血症、传染性单核细胞增多症等Hp也明显减低，此时不能以此指标判断有无溶血。 2.增高：常见于感染、创伤、SLE、恶性肿瘤、类固醇治疗、妊娠、胆道阻塞等（Hp为急性期反应蛋白）。此时如Hp正常，不能排除合并溶血的可能。 血浆高铁血红素白蛋白检测 原理：血浆中游离的血红蛋白可被氧化为高铁血红蛋白，再分解为珠蛋白和高铁血红素，后者先与血红蛋白结合，血红蛋白消耗完后，再与白蛋白结合形成高铁血红素白蛋白，与硫化铵形成一个易识别的铵血色原，用光谱仪观察结果，于绿光区558nm处有一最佳吸收区带。 参考范围：阴性 应用评价：血管内溶血时，血浆中游离血红蛋白大量增加，血浆中可检测出高铁血红素白蛋白，血清中出现高铁血红素白蛋白是溶血严重的指标。 尿含铁血黄素试验 实验原理：尿含铁血黄素试验又称Rous试验。当血红蛋白通过肾滤过时，部分铁离子以含铁血黄素的形式沉积于上皮细胞，并随尿液排出。尿中含铁血黄素是不稳定的铁蛋白聚合体，其中的高铁离子与亚铁氰化钾作用，在酸性环境下产生普鲁士蓝色的亚铁氢化铁沉淀。尿沉渣肾小管细胞内可见直径1~3um的蓝色颗粒。 参考范围：健康人为阴性。 应用评价：Rous试验阳性提示慢性血管内溶血，尿中有铁排出，无论有无血红蛋白尿，只要存在慢性血管内溶血如PNH，本实验即成阳性，并可持续数周，但在溶血初期，虽然有血红蛋白尿，上皮细胞内尚未形成可检出的含铁血黄素，此时本实验可呈阴性反应。