实验四 凯氏定氮法测定蛋白质含量研讨.pptVIP

* 实验一 凯氏定氮法测定蛋白质含量 凯氏定氮法 是测定化合物或混合物中总氮量的一种方法。即在有催化剂的条件下，用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐，然后在碱性条件下将铵盐转化为氨，随水蒸气馏出并为过量的酸液吸收，再以标准酸滴定，就可计算出样品中的氮量。由于蛋白质含氮量比较恒定，可由其氮量计算蛋白质含量，故此法是经典的蛋白质定量方法 【目的】 了解凯氏定氮法测定蛋白质含量的方法、意义及应用 【原理】 蛋白质是含氮的有机化合物。蛋白质与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量计算出氮的含量，然后乘以相应的换算系数，即得蛋白质的含量。 1.有机物中的铵根在强热和催化剂及浓H2SO4作用下，消化生成（NH4）2SO4，反应式为： 2NH2+H2S04+2H+＝(NH4)2S04 （其中CuSO4做催化剂） 2.在凯氏定氮仪器中与碱作用，通过蒸馏释放出NH3，收集于H3BO3 溶液中，反应式为: 　　 (NH4)2SO4+2NaOH＝2NH3↑+2H2O+Na2SO4 　　 2NH3+4H3BO3＝(NH4)2B4O7+5H2O 3. 用已知浓度的HCl标准溶液滴定，根据HCl消耗的量计算出氮的含量，然后乘以相应的换