第七章微生物的遗传变异和育种技巧.ppt

* * * * * * Transformation Figure 10.13 * 质粒转化 * 6、 转染 转染：指用提纯的病毒核酸（DNA或RNA）去感染其宿主细胞或其原生质体，可增殖出一群正常病毒后代的现象。 与转化的区别：作为转染的病毒核酸，不作为供体基因，被感染的宿主也不是能形成转化子的受体菌。 * (二) 转导 转导：通过完全缺陷或部分缺陷噬菌体的媒介，把供体细胞的DNA小片段携带到受体细胞中，通过交换和整合，使受体细胞获得部分遗传性状的现象。 * 1、 普遍性转导 普遍性转导：通过极少数完全缺陷噬菌体对供体菌基因组上任何小片段DNA进行“误包”，而将其遗传性状传递给受体菌的现象。一般用温和噬菌体作媒介 。 分为完全转导和流产转导 (1) 完全普遍转导：转导DNA整合到受体细胞染色体上，并能产生稳定的转导子的转导。 (2) 流产普遍转导：转导的DNA不整合到受体细胞的染色体上，虽然不能继续复制，但仍然表达基因功能的转导。这是一种单线遗传的方式。 * 2、 局限转导 局限转导或限制性转导(specialized transduction，restricted transduction ) (1) 特点 ① 只局限于传递供体菌核染色体上的个别特定基因，一般为噬菌体整合点两侧的基因； ② 该特定基因由部分缺陷的温和噬菌体携带； ③ 缺陷噬菌体的形成方式是由于它在脱离宿主核染色体过程中，发生低频率的误切或由于双重溶源菌的裂解而形成； ④ 局限转导噬菌体的产生主要通过对溶源菌的诱导裂解。 * (2) 分类 低频转导 指通过一般溶原菌释放的噬菌体所进行的转导，因其只能形成极少数转导子，故称低频转导。 高频转导 在局限转导中，若对双重溶原菌进行诱导，就会产生含50%左右的局限转导噬菌体的高频转导裂解物，用这种裂解物去转导受体菌，就可获得高达50%左右的转导子，故称高频转导。 * Generalized Transduction Figure 10.14 * Specialized Transduction Figure 10.15 * 3、 溶原转变 溶原转变：当正常的温和噬菌体感染宿主而使其发生溶源化时，因噬菌体基因整合到宿主的核基因组上，而使宿主获得了除免疫性外的新遗传性状的现象，称溶原转变。 * (三) 接合 接合：供体菌（“雄性”）通过性菌毛与受体菌（“雌性”）直接接触，把F质粒子或其携带的不同长度的核基因组片段传递给后者，使后者获得若干新遗传想状的现象，称为接合。 E.coli 的四种接合性菌株为： F+ F- Hfr F * F+与F-的接合 Hfr与F 的接合 * (四) 原生质体融合 原生质体融合：通过人为的方法，使遗传性状不同的两个细菌的原生质体进行融合，借以获得兼有双亲遗传性状的稳定重组子的过程，称为原生质体融合。 * 二、真核微生物的基因重组 真核微生物中，基因重组的方式主要有： 有性杂交 准性杂交 原生质体融合 遗传转化等。 * (一) 有性杂交 杂交：是指在细胞水平上进行的一种遗传重组方式。 有性杂交：一般指不同遗传型的两性细胞间发生的接合和随之进行的染色体重组，进而产生新遗传型后代的一种育种技术。 (二) 准性杂交 准性生殖：是一种在同种而不同菌株的体细胞间发生的融合，可不借助减数分裂而导致低频率基因重组并产生重组子。 半知菌的准性生殖示意图 * 第四节 基因工程 基因工程(gene engineering)，或遗传工程(genetic engineering)，确切地讲是重组DNA技术(recombinant DNA technique)，20世纪70年代兴起，指在体外将不同来源的DNA进行剪切和重组，形成镶嵌DNA分子(chimeric DNA molecules)，然后将之导入宿主细胞，使其扩增表达，从而使宿主细胞获得新的遗传特性，形成新的基因产物。 * 基因工程的3个基本步骤: (1) 从合适材料分离或制备目的基因或特定DNA片段； (2) 目的基因或特定DNA片段与载体连接，成为重组DNA分子； (3) 重组DNA分子引入宿主细胞，在其中扩增和表达。 * 一、限制性核酸内切酶 限制性核酸内切酶（限制性内切酶）：是原核生物中限制和修饰系统的一个重要部分，在1970年开始分离得到。 基因工程中常用的限制性内切酶是一类有特异的和对称的识别与切割位点，识别顺序一般在4～6bp的限制性内切酶（类型Ⅱ），分子量在20～100kDa，反应需Mg2+。这类酶切割DNA后，在DNA片段的末端可以产生有单链的粘性末端或平末端。 * 二、目的基因的分离和制备 1、 分离原核生物基因 主要方法是鸟枪法，将染色体随机切断，