猪群常见疾病实验室诊断技术.pptVIP

注意事项 上课时间：2009年11月13日全天报到，14日～22日实验技能培训。 上午8：30上课，下午2：30上课 实验培训地点：华南农业大学兽医学院传染病实验室（即23号楼一楼） 安全问题： 吃饭：各饭堂、宾馆、东园等 猪病越来越多、越来越复杂 诊断 病理剖检变化、流行病学资料、实验室诊断、生产记录等判定疑似疾病 细菌的染色 ↓ 形态学观察 ↓ 培养基的制备 ↓ 细菌分离培养 ↓ 移植 ↓ 细菌的生化试验 ↓ 药物敏感试验 聘请原广州力智农业公司 现为德国勃林格公司高级区域技术部 方树河 总经理 采样注意事项 个人防护 典型病变：具有代表性、针对性 尽量无菌 适时采样 合理采样 适量采样 猪的常规检查 检查外观部位：眼、口、鼻、皮肤、肛门 检查器官：淋巴结、心脏、肺、肝、脾、胃、小肠、大肠、肾、膀胱、浆膜及浆膜腔、睾丸、肌肉、脑等 繁殖记录 采食和饮水 温度 …… 第二部分 病料的采集、运输与保存 血清：2-5mL，不能溶血 各组织脏器：新鲜、尽量无菌 疑似病毒性疾病，-20℃以下保存 疑似细菌性疾病，尽快分离，-4℃保存 采样的时机是否适宜 样品是否具有代表性 样品处理、保存、运送是否合适及时 与检验结果的准确性、可靠性关系极大。 采集检验样品时，需要符合以下规定：? 1．适时采样　根据检疫要求及检验项目的不同，选择适当的采样时机十分重要。样品是有时间要求的，应严格按规定时间采样；有临诊症状需要作病原分离的，样品必须在病初的发热时或症状典型时采样，病死的动物，应立即采样。 2．合理采样　按照检疫规定要求，须严格按照规定采集各种足够数量的样品外，不同疫病的需检样品各异，应按可能的疫病侧重采样。对未能确定为何种疫病的，应全面采样。 3．典型采样　选取未经药物治疗、症状最典型或病变最明显的样品，如有并发症，还应兼顾采样。? ?4. 无菌取样　采集检验样品除供病理组织学检验外，供病原学及血清学等检验的样品，必须无菌操作采样，采样用具、容器均须灭菌处理，尸体剖检需采集样品的，先采样后检查，以免人为污染样品。? 5. 适量采样　采集样品 2-5mL一次性注射器采血，将采完血样的注射器活塞，微微拔出一些，使针筒内留有部分空气，然后盖好针头盖子，将注射器针头向上成30度角，斜放，等待血液完全凝固（大概10分钟到30分钟），此过程中不能移动注射器，防止溶血。使用试管和青霉素瓶时也是一样。 （2）鼻、咽拭子的采集： 用无菌棉拭子在咽部涂抹数次后，放入含0.5-2ml 生理盐水、Hank液的试管中，棉拭子接触手的部分应及时折断或剪断去掉，然后盖紧试管。 对黏液脓血便应挑取黏液或脓血部分； 液状粪便采集水样便或含絮状物的液状粪便2～5ml； 成形粪便至少取蚕豆大小粪便1块（约5g）放于灭菌容器内，最好加有保存液或增菌液； 若无法获得粪便时，可用保存液或增菌液湿润过的棉拭子插入肛门4～5cm深处轻轻转动一圈，取直肠表面的黏液后取出，盛入运送培养基或保存液中送检 用于各种病毒性疾病病原检测病料的采集和保存以下提到病料样品，如不是直接进行实验，都需要冷冻保存（-20℃）以下！ 保证整个过程中，病料始终处于低温状态，十分重要。 一个简单的方法是，用废弃的矿泉水瓶，灌水后，放置在冰箱中，制备冰块，在病料运输时，将足量的冰块和病料一起放置在保温箱中（用冰块包裹所有病料，如果冰块不够多，最好将冰块放置在病料的上面和下面。密封后，由专人快速运送到检测单位。 分离病毒的组织病料：可放于50％甘油缓冲液中（pH8.0），在5℃条件下保存数周，也可用由0.5％水解蛋白，2％小牛血清，青、链霉素各500U／ml，制霉菌素50U／ml组成的溶液保存。 5－10％蛋黄生理盐水。 （5）细菌性疾病病料的采集、运送 在选择细菌性疾病病原检测病料时，要选择有代表性的病例。 未经抗生素治疗的病猪（最近1周未经抗生素治疗）。 有条件的最好选用活体送检。 如果是用于细菌分离的病料，必须新鲜运送，并保证整个过程中，病料始终处于低温状态（但绝对不能结冰），即4 ℃ 采样尽量无菌操作，保证无人为的污染 水样：水样来源主要是下水、自来水、猪槽等。 采样器具有用于手工采样的采样瓶和自动采样器。手工采样是将水样瓶用铁架固定，塞住瓶口，待瓶沉入到一定深度时拉开瓶塞，让水样进入。 用于调查中毒的样品：包括中毒猪的呕吐物、排泄物等。 胃内容物：是确定中毒的最好样本之一。 所采集的样本可用玻璃、聚乙烯或聚四氟乙烯器皿盛装，避免使用金属器皿。采集量最好达到1OOg（ml）以上。 二、疑似病原后的具体的采样部位 猪 瘟（CSFV） 病毒分离 荧光抗体试验（FAT） ELISA RT-PCR 中和试验…… 白细胞减少 扁桃体 淋巴结 血清 精液 肺脏 伪狂犬 脑 扁