山东大学细胞第二十章研讨.ppt

第二十章 细胞工程 1．细胞培养 1962年开始，用于生物医学研究，生产酶制剂，生长因子，疫苗，单抗等 2．细胞融合 3. 细胞拆合 4. 哺乳动物胚胎培养和胚胎移植 5．转基因技术：转基因动物；转基因植物 6．哺乳动物克隆技术：动物克隆；细胞克隆 1．细胞培养 植物细胞培养 植物组织与细胞培养、原生质体培养 无性繁殖 消除病害 种质保存 合成次生代谢物 动物细胞培养 血清、无血清 Vero细胞和狂犬病毒的培养工艺 2．细胞融合 两个或两个以上的细胞融合成一个细胞的过程。 单克隆抗体 融合：B淋巴细胞+骨髓瘤细胞 筛选：HAT选择培养液，HGPRT-、TK-骨髓瘤细胞株 HAT系次黄嘌呤（hypoxantin）、氨基蝶呤（aminopterin）和胸腺嘧啶脱氧核苷（thymidin）三种物质各英文首字之缀列，HAT培养基也就是指含有这三种物质的细胞培养基。 3．细胞拆合 细胞拆合：把细胞核与细胞质分离开来，然后把不同来源的细胞质和细胞核相互配合，形成核质杂交细胞。 方法： （1）物理法：微玻璃针、紫外线、激光。 （2）化学法：细胞松弛素B处理，并结合离心技术，将细胞拆分为核体（karyoplast）或称小细胞（minicell）和胞质体（cytoplast） 4．哺乳动物胚胎培养和胚胎移植 （1）胚胎培养。体外受精。 （2）胚胎移植。 （3）嵌合体。 （4）胚胎干细胞（embryonic stem cell, ES细胞）—早期胚胎内细胞团分离来的，能在体外培养的一种高度未分化的全能或多能细胞。 ES细胞的特点：A：具有全能性或多能性；B：可在体外扩增、进行遗传操作，而不失去其全能性。C：在条件培养基或饲养层细胞上，才处于未分化状态。 ES细胞的主要应用：A：制作转基因动物。B：基因打靶或称基因敲除。C：克隆细胞和组织 干细胞增殖特性 缓慢性，自稳性 干细胞分类 人体干细胞基本分为三种类型：全能干细胞、多能干细胞和专能干细胞。 体内干细胞的意义在于源源不断地补充体内一些短命组织的细胞来源，如血液细胞、皮肤细胞以及精巢等，或者组织或器官受到局部损伤时，它们可以再分裂形成新的该组织和器官，是体内的一种自我修复机制。 人类干细胞工程就是利用人体内干细胞的特征来达到体外产生人类所需的产物的探索。主要用于器官修复，基因治疗等。 5. 转基因技术 转基因动物 转基因植物 6．哺乳动物克隆技术 克隆动物在畜牧业和医学方面的应用：（1）良种家蓄的培育； （2）研究药理的实验动物； （3）保护濒危动物； （4）提供治疗疾病的组织器官； （5）与转基因动物技术结合，提高转基因动物的生产效率。 植物细胞工程 植物细胞工程，就是进行物种改良，选育优良作物品种，增加植物的优良性状，利用植物生产各种化学制品，还可用于保留濒危灭绝和有重要经济价值的植物物种。 植物细胞工程技术： 　　一、快速繁殖技术　　通过植物体细胞胚胎再生成一完整植株。这种技术主要用于花卉、树木、蔬菜、果树、中草药和农作物的快速繁殖。　　二、诱导增加或减少植物体内染色体组数的技术　　有些植株的染色体比正常细胞少一半（单倍体），而有些经诱导后染色体加倍（多倍体）。单倍体对植物品种的改良很有利；多倍体产量高，为不同倍性植物间的杂交提供了遗传保证。　　三、体细胞杂交技术　　利用自然或人工方法使两个工几个不同细胞融合成一个细胞，形成体细胞杂种。　　四、植物细胞应用生产技术　　利用植物细胞培养技术，给植物细胞提供最适宜的生活环境，让它们进行无性繁殖，大量地培养成植株，解决天然资源的不足。 二. 植物细胞培养 植物细胞培养定义 在离体条件下，将愈伤组织活则其他易分散的组织置于液体培养基中，进行振荡培养，得到分散成游离的悬浮细胞，通过继代培养使细胞增殖，从而获得大量的细胞群体的一种技术。 PERSPECTIVES for the Future Advances in the culture of human cells will allow them to be applied to the treatment of disease and injury. Even today, severe burn patients can be treated by removing some of their undamaged skin, culturing the fibroblasts, and applying them to areas where the skin has been destroyed. As specific growth factors for various cell types are i