实验七聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白质.pptVIP

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  • 2017-10-03 发布于重庆
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实验七聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白质.ppt

实验七聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白质

实验七 聚丙烯酰胺凝胶电泳 分离血清蛋白质 聚丙烯酰胺凝胶电泳采用不连续系统(即缓冲液成分、pH及凝胶孔径不连续)聚丙烯酰胺凝胶电泳,通过浓缩效应、分子筛效应、电荷效应,将血清中各蛋白质成份依其分子大小、电荷多少不同而进行高效分离。 TEMED-四甲基乙二胺,避光保存。 过硫酸铵(新鲜配制) 染色液:0.1%溴酚兰液 洗脱液:7%醋酸 其他试剂:见下表贮存液的配制。 用毛细滴管灌胶于电泳管中至离管口1.5cm处,然后在距胶面约1cm处,沿玻管壁缓缓加入3-5mm高的水层,垂直静置至再次出现界面时表明凝胶已经聚合。 倒入上槽缓冲液盖过玻管上端,排出管内的空气,检查有无漏液。用微量加样器吸样品液30ul,加在浓缩胶上。 思考题 1. 圆盘电泳的分辨率为什么比其他电泳高? 2. 圆盘电泳灌胶时表面要加盖一层水,为什么? 生物化学与分子生物学实验 掌握盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理 学习盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳的操作技术 了解盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳的应用 实验目的 实验原理 由单体聚丙烯酰胺(Acr)和甲叉双丙烯酰胺(Bis)交联而成的三维网状结构凝胶。 Bis:交联剂 过硫酸铵(AP) :引发剂,提供自由基, 引发聚合反应

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