转基因丁酰胆碱酯酶的酶学性质研究.pptxVIP

我们毕业啦其实是答辩的标题地方转基因丁酰胆碱酯酶的酶学性质研究论文绪论研究背景研究方法与结果CONTANTS总结与展望论文绪论研究背景研究方法与结果论文绪论总结与展望“ 本论文以转基因丁酰胆碱酯酶为研究对象，通过Ellman检测法获得转基因酶的基本酶学性质，进而为转基因丁酰胆碱酯酶实现工业化生产、以及农残快速检测检测和临床诊疗奠定基础。”研究背景研究方法与结果总结与展望研究背景论文绪论丁酰胆碱酯酶是生物体内一种重要水解酶，能与有机磷毒剂或杀虫剂结合，并能水解许多酯类、肽类及酰胺类化合物，参与某些药物的代谢过程，它还有促进细胞生长的作用。12天然的丁酰胆碱酯酶主要从哺乳动物和家禽的血清和肝脏，以及鱼类的脑组织中进行分离纯化。原材料和分离纯化成本的限制，使丁酰胆碱酯酶的应用有一定局限性。3转基因丁酰胆碱酯酶的研究目前主要集中在应用昆虫和哺乳动物细胞表达系统来重组表达人源丁酰胆碱酯酶，但其表达量和生物活性还不能让人满意。研究方法与结果研究背景论文绪论总结与展望研究方法与结果诱导表达YPD平板上划线YPD液体培养基 BMGY培养基A离心收集菌体细胞BMMY 培养基重悬诱导表达分离纯化B镍柱亲和层析、透析过夜、超滤浓缩酶学性质获得C参照Ellman 方法，稍加改进。以碘化硫代丁酰胆碱作为底物，DTNB溶液作为显色剂，丁酰胆碱酯酶将底物分解后，产物硫代胆碱与DTNB反应，生成一种黄色络合物，在412nm处比色，以显色程度来确定酶活性。总结与展望研究背景论文绪论研究方法与结果最适温度热稳定性最适pH酶学性质金属离子影响pH稳定性总结与展望研究方法与结果研究背景论文绪论不同金属离子(1mM)相对酶活力(%)None100.0 ± 2.45Li+121.97± 5.92Mg2+77.53± 5.92Ca2+99.24 ± 7.73Cu2+20.22 ±7.17Na+93.26± 3.95Mn2+90.15 ± 8.49Fe2+89.89 ± 4.24Co2+123.11 ± 0.93EDTA128.09 ±3.57Zn2+125.38 ± 3.55Ag+83.15±2.13K+40.19 ± 3.62Li+、Co+、Zn2+ 和 EDTA对该酶的酶活性具有激活作用，Mg2+、Mn2+、Fe2+、Ag+对酶的活性具有抑制作用。表5-5 不同金属离子的影响总结与展望研究背景论文绪论研究方法与结果总结与展望总结 转基因人源丁酰胆碱酯酶的最适pH为7.4 ，最适温度为50℃，且有较好的pH稳定性与热稳定性。与天然人源丁酰胆碱酯酶基本相似，除最适温度相差较远。推测原因是表达载体毕赤酵母虽具有蛋白翻译后加工修饰的功能，但与天然蛋白的折叠加工尚存在一定差异，故重组酶的构象与天然酶存在差异，造成酶学性质的改变。 Li+、Co+、Zn2+ 和 EDTA对转基因酶的酶活性具有激活作用，Mg2+、Mn2+、Fe2+、Ag+对酶的活性具有抑制作用。研究背景论文绪论研究方法与结果总结与展望展望 本研究仅仅完成了转基因丁酰胆碱酯酶酶学性质的初步探索，距离农药残留的快速检测还相差较远。进一步研究转基因酶对不同OP类、CB类农药的敏感性、抑制率与检测限，实现以转基因人源丁酰胆碱酯酶为材料依托的农残快速检测。??THANKS