蛋白质组学T3学案.pptVIP

基因组计划的局限 无法解决“基因精细调控”问题 “mRNA” 无法反映蛋白质的质与量。 Why Proteomics?! 蛋白质组学(proteomics) 指应用各种技术手段来研究蛋白质组的一门新兴科学，其目的是从整体的角度分析细胞内动态变化的蛋白质组成成份、表达水平与修饰状态，了解蛋白质之间的相互作用与联系，揭示蛋白质功能与细胞生命活动规律。 蛋白质组研究中的样品分离 双向凝胶电泳two-dimensional electrophoresis，2-DE)：利用蛋白质的等电点和分子量，结合凝胶化学特性，分离各种蛋白质的方法。 工作原理： 根据蛋白质等电点的不同进行第一向等电聚焦电泳分离 转移到第二向SDS-聚丙烯酰胺凝胶上，再根据相对分子质量大小不同进行分离 固相pH梯度等电聚焦电泳（第一向）示意图 3.酵母双杂交技术（Yeast two-hybird system） 酵母的转录激活因子GAL4： N端有一个DNA结合域(DNA binding domain，BD)， C端有一个转录激活域(transcription activation domain，AD)。 GAL4分子的DNA结合域可以和上游激活序列(upstream activating sequence，UAS)结合，而转录激活域则能激活UAS下游的基因进行转录。但是，单独的DNA结合域或转录激活域不能激活基因转录，它们之间只有通过某种方式结合在一起才具有完整的转录激活因子的功能。 基本原理：将高度密集排列的蛋白分子作为探针点阵固定在固相支持物上，当与待测蛋白样品反应时，可捕获样品中的靶蛋白，再经检测系统对靶蛋白进行定性和定量分析。 依据的杂交反应原理: 抗原-抗体反应 配体-受体反应 蛋白质-蛋白质相互作用 蛋白质芯片的类型 * * L/O/G/O * T3 组员：王成 梅凯星 钟启武 曹婷婷 蛋白质组学 1、蛋白质组学是用来干什么的？ 2、我们是怎么来研究蛋白质组学的？ ? ? 2001年，人类基因组序列图谱初稿的公布，但是，基因只是遗传信息的载体，蛋白质才是生物细胞赖以生存的各种代谢和调控途径的主要执行者。 蛋白质组学研究的历史背景和意义 30000-40000 genes 30000 genes 80% homologous One Genome – different Proteomes Life is based on proteins and their interactions 前言—从基因组学到蛋白质组学 翻译后修饰 相互作用 构象变化 翻译后拼接 移位 胞质 胞核 蛋白质的多样性 生命的“万花筒” 生命现象的发生往往是多因素影响的,必然涉及到多个蛋白质; 多个蛋白质的参与是交织成网络的,或平行发生的,或级联因果; 在执行生理功能时蛋白质的表现是多样的、动态的，并不像基因组那样基本固定不变。 要对生命的复杂活动有全面和深入的认识，必然要在整体、动态、网络的水平对蛋白质进行研究. 传统的蛋白质研究方法不能满足后基因组时代的要求 Wilkins 表达蛋白组学 The study of global changes in protein expression Proteomics 蛋白质组功能模式 The systematic study of protein-protein interactions through the isolation of protein complexes 蛋白质组研究包括两个方面： 1.细胞与组织的蛋白质组分的变化 双向凝胶电泳two-dimensional electrophoresis，2-DE) 等电聚焦电泳进行过程中 等电聚焦电泳结束后 （＋） （＋） （－） （－） 低pH 低pH 高pH 高pH 第一向等电聚焦电泳（isoelectrophoresis focusing, IEF） 聚丙烯酰胺凝胶内的缓冲液在电场作用下沿电场方向在凝胶内制造一个pH梯度。每种蛋白质都将迁移至与它的pI 相一致的pH处。 双向凝胶垂直电泳 双向电泳后的凝胶经染色后蛋白呈现二维分布图：水平方向反映出蛋白在pI上的差异，垂直方向反映分子量上的差别。 第二向SDS电泳 3-4 mm 70 - 240 mm gel Plastic backing 蛋白质二维电泳图谱 30 10 kDa pH 10 pH 3 pI 2.研究蛋白质间相互作用的技术 免疫共沉淀技术（Co-Immunoprecipitation） 酵母双杂交技术（Yeast two-hybird system） 原理：当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用