呕吐毒素定量卡法在小麦面粉等农副产品中应用.docVIP

呕吐毒素定量卡法在小麦及面粉等农副产品中的应用 一、呕吐毒素介绍： 呕吐毒素又称脱氧雪腐镰刀菌烯醇,是单端孢菌素烯烃中的一种。作为一种常见的真菌毒素，呕吐毒素在自然界中广泛存在于小麦等粮谷类农作物中，在世界范围内存在着较高的污染率。小麦一旦被呕吐毒素产毒霉菌株污染，在适宜生长环境中，产毒菌株会迅速生长，产生呕吐毒素，而小麦中的呕吐毒素又会随小麦粉的生产过程带入到面粉中，严重威胁人体健康。 由于DON的严重影响引起了各国的普遍重视。美国食品药物管理局规定食品中呕吐毒素安全标准是1000ug/kg,而欧盟制定的限量标准相对较严，谷粉及玉米粉中允许限量750ug/kg 。我国2013年国家风险监测计划已将小麦和面粉中呕吐毒素含量的检测列为重点。 二、小麦和面粉中呕吐毒素国家残留限量标准 大麦、小麦、麦片、小麦粉≤1000ug/kg 三、呕吐毒素定量卡的行业标准： LS/T6113-2015《粮油检测 粮食中脱氧雪腐镰刀菌烯醇测定 胶体金快速定量法》 四、呕吐毒素定量卡法检测方案 美国Charm公司推出的呕吐毒素定量检测条可在十几分钟内快速定量的检测出大麦、小麦、面粉中呕吐毒素的残留量，济南痕量生物提供下述样品前处理简单，检测操作简便，结果准确、可靠，准确性符合HPLC法的检测结果，适用于各类小麦收储、面粉加工企业及检测机构，。 呕吐毒素定量检测试纸条的性能 检测灵敏度：0-1.5ppm（稀释的提取物） 1-6ppm（二次稀释的提取物） 检测限： ≤100ppb 2、检测所配备的仪器和耗材 编号 名称 数量 1 ROSA孵育器（45℃） 1台 2 ROSA-M读数仪 1台 3 打印机（可选） 1台 4 4000转低速离心机 1台 5 旋转摇床或漩涡混合仪 1台 6 粉碎机（500克） 1台 7 天平（感量0.01g 1台 8 50ml/100ml离心管 若干 9 1.5ml离心管 若干 10 20目标准筛 1个 11 10μl-100μl移液器 1把 12 100μl-1000μl移液器 1把 3、样品前处理过程： 3.1稀释提取物 可定量检测0-1.5ppm呕吐毒素 称取5g或10g粉碎均匀、过20目标准筛、具有代表性的样品至干净的50ml或100ml离心管中；加入体积为样品重量5倍的样品提取液（蒸馏水或去离子水）25ml或50ml；剧烈振荡1min，请勿超过2min；静置1min；取上清液1ml至1.5ml离心管中，4000r/min离心1min；取100ul样品提取液至1.5ml离心管中并加入1ml稀释缓冲溶液混匀，得到稀释提取物。 3.2二次稀释提取物 可定量检测1-6ppm的呕吐毒素 移取300μl的稀释提取物加入1.0ml稀释缓冲溶液混匀，得到二次稀释提取物。 3.3检测操作过程 首先将检测条放入孵育器内（确保孵育器温度为45±1℃），撕开封口胶条的薄膜至指示线，加入300ul稀释后的样品提取物到样品槽，之后重新封好胶条。盖好孵育器顶盖并锁定，红灯闪烁自动孵育开始，5min后孵育结束。 孵育结束后，从孵育器中取出检测条，读数前使样品槽一端向下放置，2分钟内读取结果。 目测判读检测结果的有效性，如无质控线 C线）或者质控线（C线），检测线（T1、T2 严重不均匀，均需要重新检测。 如检测有效，即可用读书仪读取检测结果。 将检测条放入读数仪内，选择DON频道及相应的MATRIX类型，点击ENTER即可开始读数，几秒钟后，读书仪即可将定量结果显示到显示屏上。 MATRIX 00：检测稀释提取物（0-1.5ppm MATRIX 01：检测二次稀释提取物（1-6ppm 注意事项 检测条上的碎片影响ROSA或者EZ-M的光学性能，因此在将检测条插入ROSA或者EZ-M 前，应擦去检测条上的灰尘，以保持设备清洁； ROSA或者EZ-M应水平放置并保持清洁，温度应设在45±1℃。暂时不用时放低ROSA或者EZ-M的盖子，但不要锁定； ROSA达到适合的温度需要10分钟左右，EZ-M约需3分钟，具体时间取决于室温。 储藏 储藏条件：检测条于0-7℃保存，避免冷冻。 6、定量检测试纸条的亮点： （1）检测时间短，整个过程不超过15min。 （2）检测结果准确、可靠、稳定，同时能增加定量范围。 （3）样品前处理简单，检测操作简便，操作人员可在短时间内熟练掌握。