内毒素对THP1源性巨噬细胞PCSK9和LDLR表达影响.pdf

3 目 录 中文摘要……………………………………………………………………………1 英文摘要……………………………………………………………………………3 正文……………………………………………………………………………5 前言………………………………………………………………………………5 实验材料…………………………………………………………………………8 实验方法………………………………………………………………………10 实验结果………………………………………………………………………14 讨论……………………………………………………………………………23 实验结论………………………………………………………………………26 参考文献………………………………………………………………………27 主要英文缩略语索引…………………………………………………………31 综述…………………………………………………………………………………32 硕士期间发表的论文…………………………………………………………44 致谢…………………………………………………………………………………45 万方数据 1 内毒素对THP-1源性巨噬细胞 PCSK9和LDLR表达的影响 研究生：龚慧琴 导 师：刘录山 教授 文红艳 教授 专 业：心血管内科 中文摘要 目的 以THP-1源性巨噬细胞为研究对象，经内毒素处理后，观察细胞水平PCSK9、 LDLR 的变化及其规律，以便了解 PCSK9 是否介导内毒素在动脉粥样硬化发展 中起作用。 方法 用不同浓度的内毒素 (0, 0.1, 1, 10, 100 μg/ml) 处理经 160 nmol/L佛波酯诱 导贴壁的 THP-1源性巨噬细胞不同时间 (0, 3, 6, 12, 24 h)，RT-PCR、Western blot 分别检测 PCSK9、LDLR mRNA和蛋白质的表达。应用 Lipofectamine2000 转染 80 nmol/L PCSK9 siRNA进入 THP-1源性巨噬细胞后，Western blot 检测 LDLR 蛋白质的表达以及油红 O染色观察细胞内脂质含量。 结果 随着内毒素浓度的增加，THP-1源性巨噬细胞 PCSK9 mRNA、蛋白质的表 达逐渐增多。但是随着内毒素浓度的增加，THP-1源性巨噬细胞 LDLR 蛋白质表 达逐渐减少；RT-PCR检测发现，LDLR mRNA表达在早期时间 (3 h和 6 h) 减 少，但随后 (12 h 和 24 h) LDLR mRNA表达逐渐增多，到 24 h 表达量略多于对 照组。PCSK9 siRNA转染THP-1源性巨噬细胞后，与LPS单独处理组相比，PCSK9 siRNA组、PCSK9 siRNA+LPS 组 LDLR 蛋白质表达都增多，PCSK9 siRNA组表 达最为明显，其细胞内脂质的含量最多。 万方数据 2 结论 1. 内毒素上调 THP-1 源性巨噬细胞 PCSK9 mRNA、蛋白质的表达；下调 THP-1源性巨噬细胞 LDLR 蛋白质的表达，而对于 LDLR mRNA 的表达是可变 化的； 2. 内毒素通过 PCSK9下调 THP-1源性巨噬细胞 LDLR 的表达，影响脂质的 蓄积。 关键词 内毒素；THP-1源性巨噬细胞；枯草溶菌素转换酶 9；低密度脂蛋白受体； 炎症 万方数据 3 Effects of LPS on Expression of PCSK9 and LDLR in THP-1 derived Macrophages ABSTRACT Objective In our study, we investigated the effect of lipopolysaccharide on expression of PCSK9 and LDLR in THP-1 derived macrophages, tried to find the variation and regularity of PCSK9 and LDLR at the cellular level, and in order to understand whether PCSK9 mediates lipopolysaccharide play a role in the development of atherosclerosis. Methods Human THP-1 cells were differe