分子实验操作误区重点.pptxVIP

常规分子生物学实验操作误区及经验浅析 报告内容 一 实验过程中存在的主要问题 实验效率低 1、实验前材料准备不足，导致实验过程中临时配置或购买某些必须材料，导致延误； 2、实验理论、原理上把握不够，遇到问题不懂得分析原因，单纯地重复相同的操作，重复相同的错误。 3、时间安排不够紧凑，实验过程中出现大量的“等待”时间，不懂得合理安排利用，仅仅是在手机屏幕与手指之间白白流逝掉。 4、对实验不重视，操作过程中粗心随意，不按照标准操作进行，导致实验失败又重新进行。 5、实验操作不熟练，动作较慢，错误较多。 6、其他的一些原因。 一 实验过程中存在的主要问题 实验效率低 缺乏整体观念 文献把握不够 1、对自己的研究需要做哪些实验、做到什么程度可以讲出一个故事或者可以发表什么样的论文，没有概念。 2、实验没有针对性，特别是表型检测及拿到突变体之后的实验，见别人在做什么就做什么，没有根据自己的材料的特点设计有针对性的检测实验。 3、实验进展与原理把握不够，不能站在已发表的文献资料的原有平台上进一步提升自己研究的高度和深度。 4、对自己的研究缺乏兴趣，缺乏信心，缺乏成就感，不明白自己课题的意义，缺乏主动探索的精神。 一 实验过程中存在的主要问题 实验效率低 缺乏整体观念 文献把握不够 材料浪费严重 1、酶制剂使用过多、实验操作中样品使用过多； 2、一次性塑料制品过多使用，导致白色污染； 3、实验操作不规范，导致大量的重复实验； 4、不懂得充分利用实验材料，如KIX板显色效果差了，可以用来转板而无需直接丢弃。 二 实验室存在的实验误区 1、思想观念上的误区：操作粗犷、过于随意 实验操作过于随意，对一切实验操作抱着无所谓的心理，不按照标准实验操作进行。 ① 称量样品时随意，不擦拭样品匙，不考虑精确度，不在意样品的洒落；取琼脂粉时不称量，“大概”式添加。 ② 做凝胶不按时收胶，凝胶在外面放置太久；电泳时不根据自己的样品大小选择某种浓度的琼脂糖凝胶；电泳时电压过高；电泳液长期不更换。 ③ 制备感受态的菌直接从-80℃冰箱或长期放置的平板上取出液体培养；制备过程中过多步骤没有在冰上操作；制备的感受态不进行验证就直接做转化实验。 ④ 挥发性材料没有在室外通风处或者室内的通风厨中取用。 二 实验室存在的实验误区 1、思想观念上的误区：操作粗犷、过于随意 实验操作过于随意，对一切实验操作抱着无所谓的心理，不按照标准实验操作进行。 ⑤ 因粗心大意、不认真而导致的样品取错、溶液配方看错、实验样品混淆（不认真做笔记）、加错试剂、看错实验条件等等情况常有发生，不一而足。 ⑥ 不认真做笔记，无论是各种反应的体系、溶剂配方还是某些关键实验操作，不做笔记或者仅仅是写在临时的纸片上，之后就遗失或遗忘了。 ⑦ 实验操作的台面“脏乱差”，只能在“夹缝中”进行实验操作，可能会使得很多未知的东西从桌面混入反应体系，影响实验。 ⑧ 超净台灭菌开着风机、不关死玻璃窗、里面的材料过多，存在较多的死角。 ⑨ 不注意某些缓冲液的pH值，感觉差不多就随意用。 二 实验室存在的实验误区 1、思想观念上的误区：贪婪心理 在实验中总觉得取用的材料不够，总认为多多益善，没有微量的概念，不能克服贪婪心理，不仅造成不必要的材料浪费，还会导致实验失败，浪费大量宝贵时间。 ① 酶制剂取用过多。 ② 菌体PCR时菌体取用过多。 ③ 电泳时上样量过多。 ④ 做PCR时，模板量如总DNA、总RNA添加过多。 ⑤ 提取总DNA或质粒时，总认为菌体越多越好。 分子生物学实验中的哲学：做人勿贪！ 二 实验室存在的实验误区 1、思想观念上的误区：总怕染菌 有些同学在做实验时总觉得超净台不够干净，总怕染菌，表现在以下几个方面。 ① 超净台灭菌时间过长。 ② 每次倒平板重新灭菌。 ③ 做感受态过程中样品离心过程中超净台反复灭菌。 1、灭菌过程中产生的臭氧对人体有害、对马上进行操作的样品细胞有害； 2、紫外灯寿命缩短，作用变弱，原本18分钟可以完成的灭菌，可能需要25分钟甚至更长。 二 实验室存在的实验误区 1、思想观念上的误区：侥幸心理 侥幸心理是分子生物实验中大家最容易犯的一种错误，无论是有经验的还是没经验的同学，都不例外。 大家总是想省时间、省步骤以及对前一步实验的盲目自信是产生这种心理的主要原因。 我们现用的绝多数分子生物学实验方法都是在分子生物学基础理论的基础上，辅以前人大量的实验经验而建立的，实验条件的细小改变，不一定会导致实验失败，但如果连续几个步骤都有细小的改变，积累起来常会出大错，而一旦出错了，往往不能够找到原因在哪里。所以，我们常常遇到一些莫名其妙的实验结果，无法用我们常识的知识去解释的结果。 二 实验室存在的实验误区 1、思想观念上的误区：侥幸心理 按照标准规范认真做好每一步操作，该进行检