动物细胞工程(quanmian)教程方案.pptVIP

1.再分化的实质是____ 2.如图，B是______ 3.抗虫棉的获得涉及到的技术 4.原生质体再生出细胞壁，可以通过什么实验鉴定 5.种子发育成个体是否体现植物细胞全能性 动物细胞工程 动物细胞工程 通常采用的技术手段 动物细胞培养 动物细胞融合 单克隆抗体 动物细胞核移植 是其他动物细胞工程技术的基础。 1、动物细胞培养的概念是什么？ 2、该技术实施的原理是什么？ 1、从动物机体中取出相关组织，将它分散成单个细胞，然后在适宜的培养基中，让这些细胞生长和繁殖。 2、动物细胞培养的原理：细胞增殖 （有丝分裂） 。 一、动物细胞培养 下图是动物细胞培养的基本过程示意图。请据此回答： 1）容器A中放置的是动物器官或组织。它一般取自______________________。 （2）容器A中的动物器官或组织首先要进行的处理是 ，然后用 酶处理，这是为了使细胞分散开来，这样做的 目的是 。 动物胚胎或幼龄动物 剪碎 胰蛋白 防止细胞间接触抑制现象，使细胞与培养液充分接触，便于培养 （3）培养首先在B瓶中进行，瓶中的培养基特有成分有 __________。在此瓶中培养一段时间后，有许多细胞衰老死亡，这是培养到 第 代，到这时的培养称为__ 。 （4）为了把B瓶中的细胞分装到C瓶中，用 处理，然后配置成 ，再分装。 动物血清 10 原代培养 胰蛋白酶 细胞悬液 定义：人们通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养。 胰蛋白酶处理 取出组织 胚胎或幼龄动物器官组织 剪碎 单个细胞 细胞悬液 转入培养瓶内培养 （贴壁生长长成单层细胞。有接触抑制现象）。 ①原代培养 1、过程 图示 原代 培养 细胞悬液 CO2培养箱 原代培养细胞生长特点： 1、细胞贴壁（大多数动物细胞） 2、细胞的接触抑制 细胞贴壁过程 ■细胞贴壁：在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。 ■培养瓶或培养皿壁要求： 表面光滑、无毒、易于贴附。 ■当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。（糖蛋白） 接触抑制 原代培养 定义：把第1代细胞的培养与10代以内的细胞培养统称为原代培养。 过程：从动物机体中取出组织 ? 剪碎 ? 加胰蛋白酶? 细胞游离 ? 加培养液 ? 将细胞接种到培养瓶内 ? 培养（1—2天换一次培养液）? 细胞贴壁生长 ? 长成单层细胞 取材（动物组织） →细胞分散→初次培养 传代培养 定义：当原代培养的细胞生长停止，这时如果要使细胞继续生长，就要及时用胰蛋白酶等，使细胞从瓶壁上解离下来，然后加入新的培养液，将细胞分离稀释，并从原培养瓶内转接到新的培养瓶内，这个过程称传代培养 培养的细胞→细胞分散→继续培养 原代培养： 传代培养： 原代培养与传代培养的区别 分装之前，10代以前 分装后继续培养，10代以后 总结：动物细胞培养过程 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 配置细胞悬液 剪碎用胰蛋白酶处理 10代细胞 转入培养瓶 40-50代细胞 传代培养 无限传代 单个细胞 加培养液稀释 10代以内，遗传物质不改变，保持正常二倍体核型。 传代10-50代，增长缓慢以至于完全停止，部分细胞核型可能发生变化（10代后第一次危机） 为什么用胰蛋白酶处理？ 分瓶传代培养 原代培养特点：细胞贴壁、接触抑制 40-50代后，继续传代培养，少部分细胞获得不死性，细胞突变，遗传物质已经改变，等同于癌细胞。（40-50代后第二次危机） 原代培养 1、无菌、无毒的环境 （添加一定量的抗生素，定期更换培养液） 2、营养 葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、促生长因子、微量元素（合成培养基）+动物血清等 3、温度和PH 温度36.5+0.5度，pH7.2～7.4 4、气体环境 O2和CO2（95%空气和5% CO2 ） 2、动物细胞培养条件 保证细胞顺利的生长增殖 能否用胃蛋白酶代替胰蛋白酶？ CO2的作用：维持培养液的PH 思考：动物血清的作用？ 主要是：提供有利于细胞生长增殖所需的激素、生长因子或提供合成培养基所缺乏的营养物质等。 动物细胞培养液的主要成分： 无机盐、葡萄糖、氨基酸、维生素和动物血清等。 （1）液体培养基 （2）含有动物血清 动物体细胞大都生活在液体的环境 植物组织培养呢？ 无机盐、蔗糖 、氨基酸、维生素、植物激素 成分比较： 3、植物组织培养和动物细胞培养的比较 比较项目 植物组织培养 动物细胞培养 原理 细胞