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动物细胞工程 动物细胞培养 核移植 动物细胞融合 单克隆抗体的制备 基础 植物细胞工程包括哪几种技术？ 动物细胞工程又包括有哪几种技术？ 思考 一、动物细胞培养 （阅读课本第44-46页） 请用简图描述动物细胞培养的过程？ 培养条件如何，与植物组织培养相同吗？ 为什么取幼龄动物器官组织或动物胚胎进行培养？ 为什么要使细胞分散成单个细胞呢？ 原代培养和传代培养如何划分？ 和植物组织培养的原理相同吗？ 细胞增殖 什么叫动物细胞培养？ 见课本44页 原代培养1～10代 剪碎 胰蛋白酶 1.动物细胞培养过程 胚胎或幼龄动物的组织器官 细胞悬浮液 传至10代~50代 继续传代培养 无限传代 胃蛋白酶适宜PH为强酸性，时间久会把细胞消化了 分散成单个细胞避免接触抑制同时使其与培养液成分混合 具有癌细胞特性 无法发挥细胞的全能性 传代培养 10代后增殖缓慢慢、停止 分裂能力强 细胞贴壁生长、接触抑制 胰蛋白酶 分装 少量细胞获得不死特性(核型变化) 目前使用或保存的细胞通常为10代以内， 以保持细胞正常的二倍体 保存：1.冷冻 2.超低温 3.液氮 温度低，酶活性低，细胞代谢速率低 （2）动物血清：血清、血浆等天然成分 （提供特殊不知的营养物质和生长因子） 2.培养条件： 1.无菌、无毒的环境 培养液及培养器具均要灭菌 培养液中添加抗生素 及时更换培养液清除代谢产物。 2.营 养 3.适宜的温度和PH： （1）合成培养基： 葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、 微量元素等 4.气体环境: 95%空气+5%CO2 36.5±0.5 7.2-7.4 合成培养基（液体） + 动物血清 原代培养与传代培养的区别？ 分装 原代培养 传代培养 动物细胞培养总结图解 细胞株和细胞系的区别： 细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。 细胞株： 原代细胞一般传至10代左右细胞生 长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞 存活到40～50代，这种传代细胞为细胞株。 细胞系： 细胞株传代至50代后又出现细胞生长 停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质 的改变，使其在培养条件下可以无限制传代， 这种传代细胞为细胞系。 思考： 2、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？ 1、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培培养基有何独特之处？ 主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。独特之处有：1、液体培养基 2、成分中有动物血清等 因为这些组织或器官上的细胞生命力旺盛，分裂能力强 3、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？ 4、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？ 成块组织不利培养，分散了做成细胞悬浮液利于培养 不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体 动物细胞培养与植物组织培养的比较 项目 动物细胞培养 植物组织培养 相同点 都需无菌条件;都进行有丝分裂 不 同 点 原理 细胞的增殖 细胞的全能性 培养基 液体培养基,动物血清及其他营养物质（葡萄糖） 固体培养基,激素及其他营养物质（蔗糖） 目的 获得细胞或细胞产物等 快速繁殖、培育无病毒植株等 二、动物体细胞核移植技术和克隆动物 问题： 1.原理 2.过程 3.遗传物质来源 4.存在的问题 动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体。 细胞核的全能性 3.核移植种类 （难度高） 受体细胞：MⅡ期的卵母细胞 胚胎细胞核移植： 体细胞核移植： 细胞分化程度低，恢复全能性容易 什么是克隆? 就是无性繁殖，具体的说，是指从一个共同的祖先，通过无性繁殖的方法产生出来的一群遗传特性相同的DNA分子、细胞或个体。 二、动物体细胞核移植技术和克隆动物 用核移植的方法得到的动物称为克隆动物 高产奶牛（供体） 体细胞培养 卵母细胞体外培养至MII中期 重组胚胎（早期胚胎） 卵裂 胚胎移植 代孕母牛子宫 与供体遗传物质基本相同的犊牛 分娩 妊娠 重组细胞 电刺激,激活受体细胞 细胞质 去核与第一极体 细胞核 细胞核移植 早期胚胎 原理：细胞增殖，属 于动物细胞培养 供体细胞（供核） 细胞培养 体细胞 卵巢卵母细胞（MⅡ中期：供质） 去核 无核卵母细胞 注入 细胞融合 重组细胞 构建重组胚胎 胚胎移植 代孕母体 生出与供体奶牛核遗传基础相同的犊牛 4.体细胞核移植过程 二、动物体细胞核移植技术和克隆动物 二、动物体细胞核移植技术和克隆动物 遗传物质来源： 1.核遗传物质来自供体，细胞质来自受体卵母细胞， 所以，克隆动物与