P物质及其NK1受体参与大鼠外周伤害性信息传入引起脊髓后角小胶质细胞激活.pdfVIP

中文摘要 P物质及其NK-1受体参与大鼠外周伤害性信息传入引起的 脊髓后角小胶质细胞的激活 摘 要 目的：近年来，随着对中枢神经系统小胶质细胞功能研究的深入，其 在外周神经损伤及炎症诱发的病理性痛中的作用越来越受到重视。研究发 现，在外周神经损伤引起的神经病理性痛模型中或福尔马林、角叉菜胶等 引起的炎性痛模型中，均伴有脊髓后角小胶质细胞的激活。活化激活的小 胶质细胞通过产生和释放多种促炎细胞因子如白介素．1B，肿瘤坏死因子 ．0【等，上调表达多种活性蛋白或受体，如补体受体CD4、C3、CX3CRl， ATP受体P2X(4)等，直接或间接作用于痛觉传递神经元，使其敏化，参 与病理性痛及痛觉过敏的产生与维持。而给予小胶质细胞抑制剂米诺环素 抑制小胶质细胞的激活后，可显著抑制病理性痛及痛觉过敏的产生。以上 研究表明，小胶质细胞的激活在病理性痛及痛觉过敏的产生和维持中发挥 重要作用。但在这一过程中，小胶质细胞激活的具体机制尚不完全清楚。 P物质(Substance P，SP)是脊髓内重要的神经激肽类递质，被认为 是痛觉传递的重要信使。传统观念认为，SP主要存在于脊髓II板层初级 传入纤维(C类纤维)末梢中。它的受体神经激肽．1(neurokinin．1，NK-1) 受体主要分布在脊髓后角I板层神经元的树突和胞体上。SP通过与其 NK．1受体结合发挥作用，参与脊髓伤害性信息的传递。但是近年来的研 究发现，除了初级传入末梢外，人胚和鼠类的小胶质细胞也可以释放大量 的SP。同时，除了介导痛觉传递的二级神经元胞体外，人胚和鼠类的小 胶质细胞上也表达着有功能的NK-1受体。因此，伤害性信息传入时，引 起SP释放也可能通过胶质细胞膜上的NK．1受体参与脊髓小胶质细胞的 激活。 因此，本实验通过观察应用NK．1受体拮抗剂L．732，138对大鼠蜜蜂 毒(bee venom，BV)炎性痛及痛过敏时脊髓后角小胶质细胞CDl lb／c (OX-42)表达的影响，探讨SP及其NK-1受体在外周伤害性信息传入 引起的脊髓后角小胶质细胞激活中的作用。 方法：雄性Sprague．Dawley大鼠84只，体重250．280 g，随机分为以 万方数据 中文摘要 下5组： @Sham组(n=24)：于正常大鼠右后足底皮下注射生理盐水50 ul。 ②蜜蜂毒组(n-24)：于大鼠右后足底皮下注射蜜蜂毒溶液(49／L) 50“1。 ③蜜蜂毒+L．732，138组(n=12)：给大鼠椎管内注射10 gl NK．1受 体拮抗剂L．732，1 38(200 nm01)，1 5min后于大鼠右后足底皮下注射蜜蜂 毒溶液(49／L)50 lxl。 ④蜜蜂毒+DMSO组(n=12)：给大鼠椎管内注射10 gl 80％DMSO (L．732，138的溶剂)，15 min后于大鼠右后足底皮下注射蜜蜂毒溶液 (49／L)50“l。 (量)Sham+L．732，138组(n--12)：给大鼠椎管内注射10 gl NK．1受体 拮抗剂L．732，138(200 nm01)，15 min后于大鼠右后足底皮下注射50“l 生理盐水。 各组大鼠于足底注射生理盐水或蜜蜂毒溶液后即刻计数1 h内自发缩 足次数，观察其自发痛反应变化；并于足底注射前l d、注射后1 d、3 d、 7 d测定热缩足反射潜伏期及机械缩足反射阈值的变化；Sham组与蜜蜂毒 组于足底注射后1 h、1 d、3 d、7 d取材，其余各组于足底注射后3 d取 材，冰冻连续切片，应用免疫组化法观察L5节段脊髓后角CDl lb／c (0X．42)蛋白的表达，以观察脊髓后角小胶质细胞的激活状态。 结果： 1 NK．1受体拮抗剂L．732．138减轻足底注射蜜蜂毒大鼠的自发痛及痛过 敏反应 1．1自发痛行为反应 足底注射生理盐水后，大鼠不产生自发痛行为，而足底注射蜜蜂毒后， 大鼠出现明显的自发痛行为，表现为紧张性的舔，咬和剧烈抖动注射足， 注射足抬高，不持重或持重减轻等行为，自发痛反应评分显著增加 (尸O．05)。与蜜蜂毒组相比，椎管内预先注射L一732，138后，大鼠的自 发痛行为反应有所减轻，自发痛反应评分显著降低(P0．05)；而椎管内 预先注射DMSO对注射蜜蜂毒引起的自发痛行为无显著影响。椎管内注 射L．732，138不会引起sham组大鼠的自发痛行为。 1．2热缩足反射潜伏期和机械缩足反射阂值 万方数据 中文摘要 与注射前相比，足底注射生理盐水(sham组)后1 d、3 d和7 d，大 鼠注射足的热缩足反射潜伏期和机械缩足反射阈值无显著变化。足底注射 蜜蜂毒后，上述各时间点大鼠注射足的热缩足反射潜伏期和机械缩足反射 阈值均较sham显著降低(氏O．05)，其中以注射后1 d降低最为显著，3 d、 7 d逐渐回升，表明足底注射蜜蜂毒诱发