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* 专题3 植物组织培养技术 一、基础知识 课题1: 菊花的组织培养 1、植物的组织培养 (1)细胞的分化 ①概念: 在个体发育中,相同细胞的后代在形态、结构、生理功能上发生稳定性差异的过程 ②过程: 如:受精卵增殖、生长、分化形成组织、器官、系统 ③特点: (2)稳定性:细胞分化是稳定的,一般是不可逆转的 (3)全能性:已分化的细胞,仍具有发育的潜能 (1)持久性:是一种持久性的变化,它发生在生物体的整个生命过程中,在胚胎期达到最大限度 ⑤原因: 基因在特定的时间和空间条件下的选择性表达的结果 ④结果: 形成不同的细胞和组织 (2)细胞的全能性 ①定义: 生物体的细胞具有使后代细胞形成完整个体的潜能的特性 ②原理: 生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质,都有发育成为完整个体所必需的全部基因 高度特化的动物细胞,从整个细胞来说,全能性受到限制。但它的细胞核仍然保持着全能性,这是因为细胞核内含有该物种遗传性所需要的遗传物质 已分化的植物细胞,仍具有全能性 ③实例 受精卵生殖细胞体细胞 ④全能性的比较: 在生物的所有细胞中,受精卵的全能性是最高的, 进行有性生殖的生物体的任何一个细胞,都是由受精卵分裂、分化而成。生殖细胞,尤其是卵细胞,虽然分化程度很高,但是仍然又较高的潜在全能性,在某些条件下卵细胞可以进行孤雌生殖 (3)植物组织培养 细胞离体 ①必要条件: 一定的营养物质、激素和其他外界条件 ②原理: 细胞的全能性 外植体:从活植物体上切下进行培养的那部分细胞、组织或器官 ③相关概念: 脱分化:指已经分化的植物器官、组织或细胞,当受到创伤或进行离体(也受到创伤)培养时,已停止分裂的细胞,又重新恢复分裂,细胞改变原有的分化状态,失去原有结构和功能,成为具有未分化特性的细胞。 再分化:已经脱分化的细胞在一定条件下,又可经过愈伤组织或胚状体,再分化出根和芽,形成完整植株,这一过程叫作再分化。 愈伤组织:细胞排列疏松而无规则,是高度液泡化的、成无定性状态的薄壁细胞 人参的愈伤组织 菠萝的愈伤组织 ④过程: 离体组织或细胞 植物体 脱分化 细胞分裂素≈生长素 愈伤组织 芽 根 细胞分裂素生长素 细胞分裂素生长素 再分化 植物细胞培养 不需要光 需要光 ⑤愈伤组织形态发生方式 不定芽方式: 由愈伤组织细胞诱导分化出具有胚芽、胚根、胚轴的胚状结构进而长成完整的植株,这种由愈伤组织中的薄壁细胞不经过生殖过程,直接产生类似于胚的结构,叫做胚状体 在某些条件下,愈伤组织中的分生细胞发生分化,形成不同的器官原基,再逐渐形成芽和根 胚状体方式: 1、培育无病毒植株 2、 培养紫草愈伤组织,提取紫草素(治疗烫伤和割伤的药物以及染料和化妆品的原料) 4、基因工程中亦需到植物组织培养的方法 ⑥植物组织培养的应用: 3、诱导离体的植物组织形成具有生根发芽能力的胚状结构,包裹上人造种皮,制成人工种子,可以解决有些作物品种繁殖能力差,结子困难或发芽率低等问题 人工种子 2、影响植物组织培养的因素 (1)植物材料的选择 烟草和胡萝卜的组织培养较为容易 枸杞愈伤组织的芽诱导比较难 同一植物材料的年龄、保存时间的长短会影响实验结果 菊花的组织培养一般选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝 (2)不同的离体组织和细胞对营养、环境等条件的要求相对特殊,需配置不同的培养基 MS培养基主要成分包括: A、大量元素: N、P、K、Ca、Mg、S等 ①氮:常用的是硝态氮(如硝酸钾)和铵态氮(如硫酸铵), MS培养基即含硝态氮又含铵态氮 植物组织从培养基中吸收NO3-或NH4+后,经过一系列的反应转化成氨基酸,进而合成蛋白质,成为植物体的主要组成部分 ②磷:常由磷酸盐提供,是植物必需元素之一。磷参与植物生命过程中的核酸合成、蛋白质合成、光合作用、细胞呼吸以及能量的储存、转化与释放等重要生化过程,因此,植物组织培养中需要大量的磷 ③钾:影响植物组织培养中酶的活性和方向,决定新陈代谢的方向,对分化有一定的促进作用 B、微量元素:B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co等 ①铁:用量较多的微量元素,对植物组织叶绿素的合成和延长生长起重要作用 ②铜:促进离体根生长作用 ③钼:合成活跃的硝酸还原酶,固氮酶的组成部分,防止叶绿素被破坏 ④硼:与糖的运输、蛋白质的合成有关 C、有机物:如氨基酸、烟酸、肌醇、维生素,蔗糖等 ①常用的植物激素:生长素、细胞分裂素和赤霉素 生长素类: 2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、吲哚乙酸(IAA)、萘乙酸(NAA)、吲哚丁酸(IBA) 细胞分裂素类: 激动素(KT)、6-苄基嘌呤( 6-BA)、玉米素(ZT) 赤霉素类: 赤霉酸(GA3) (3)植物激素的影响 ②生长素和细胞分裂素作用 植物中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分
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