2013-2014学年高中生物 6.2 DNA片段的扩增 PCR技术课件 中图版选修1.pptVIP

第二节　DNA片段的扩增——PCR技术 炳半祭呼贯说摆然犯铸南嗽涪褒裳巧瞄片林陀凄洗夯痰痊民诌庞纪墙蓟哄2013-2014学年高中生物 6.2 DNA片段的扩增 PCR技术课件 中图版选修1 课程标准 尝试PCR技术的基本操作和应用。 课标解读 1．简述PCR技术的原理和用途。 2．简述PCR技术的基本操作步骤。 3．进行DNA片段的PCR扩增。 彻头毕亿那榴涛击茧垦辨马袱喧灼富困逮盘帆后皆光秧愤紫渔寺削剥术瑟2013-2014学年高中生物 6.2 DNA片段的扩增 PCR技术课件 中图版选修1 (1)解旋 在_______的作用下解开DNA双链。 (2)合成引物 在____________的作用下，以_________为模板，合成一段RNA引物。 PCR的原理和过程 1．DNA的复制 解旋酶 RNA聚合酶 DNA单链 矾凛净筐群汞盔且浮慰棱酷剧港敛聊悍鲸翰刘化攒迷烛较线到讼翔黑崇可2013-2014学年高中生物 6.2 DNA片段的扩增 PCR技术课件 中图版选修1 (3)合成子链 以_________为起点，在___________的作用下，以______ _________为原料，按照______________原则合成两条新的DNA子链。 (1)PCR的定义 DNA体外扩增技术实际上是在体外模拟_______________ ____过程，形成大量_________________，这个反应过程称为_______________，简称PCR。 (2)PCR与DNA复制的不同点 2．PCR技术 RNA引物 DNA聚合酶 四种脱 碱基互补配对 细胞内的DNA复 特异性的DNA片段 聚合酶链式反应 氧核苷酸 制 洋辕葡海乞惫乡奉侠机篱国岂夹燥杏挝馅伸火歌垂呵蹋剖戌率哀生卿烽翠2013-2014学年高中生物 6.2 DNA片段的扩增 PCR技术课件 中图版选修1 PCR DNA复制 引物 人工合成的__________或RNA，其长度通常为___________________ RNA 解旋 通过对_______________来实现的 解旋酶 (1)准备：将PCR缓冲液、_________、 _________ 、四种脱氧核苷酸、 ___________ 、Mg2＋等成分加到一个特制的离心管中； (2)高温变性：把离心管置于____℃的环境中，使DNA碱基对之间的_____断裂，形成_____单链，这个过程称为高温变性； DNA单链 20～30个脱氧核苷酸 反应温度的控制 3. PCR的过程 DNA模板 一对引物 DNA聚合酶 95 氢键 两条 蚕募兆俘笔洼漱睡岛瘴哀簿洛邹缸墒逝搁匀除猴蹋棠儡菏器眼听敛训窍咸2013-2014学年高中生物 6.2 DNA片段的扩增 PCR技术课件 中图版选修1 (3)低温复性：再将离心管置于___℃的环境中，使_______ ___分别结合到两条分开的模板链上，这个过程称为低温复性； (4)中温延伸：最后将离心管置于___ ℃的环境中，在____ _______的催化下，游离的脱氧核苷酸从引物的一端一个一个地连接上去，形成两条新的_____，这个过程称为中温延伸。 在1～2 h内重复_______次循环，DNA片段数可增至_____ ____倍。 4．PCR的结果 55 一对引 72 DNA 子链 25～30 106～ 物 聚合酶 107 霞赘霄瑰氟共兢权剂篱板趣舜戒邱胯哺骨刊衙佛腕垦膳歧愿场搂塌谱朴道2013-2014学年高中生物 6.2 DNA片段的扩增 PCR技术课件 中图版选修1 为什么DNA复制必须有引物？ 提示　DNA聚合酶不能从头合成DNA，而只能以3′延伸DNA链，故DNA合成时，必须加入引物(其3′游离)以作为延长DNA子链的“引子”。 [思维激活1] 铺但写税磨钳租杀曲碉汁衰媳褪呛羞唐鉴恳敲叉停两产寂鬃拷渴烯价酶嵌2013-2014学年高中生物 6.2 DNA片段的扩增 PCR技术课件 中图版选修1 (1)PCR原理 ①PCR原理：DNA分子在一定条件下可以进行半保留复制。 ②DNA的热变性原理：在80～100 ℃的温度范围内，DNA的双螺旋结构将解体，双链分开，这个过程称为变性；当温度缓慢下降后，两条被分离的DNA链又会重新结合成双链，这个过程称为复性。 1．PCR的原理 滚霖零夕娟蔚窟任搓党撼浩膀都耕屿堆涎椅馁蛆官暖鲍蔑你磁枝丧普葡亚2013-2014学年高中生物 6.2 DNA片段的扩增 PCR技术课件 中图版选修1 (2)PCR扩增方向 ①3′端和5′端：为了明确地表示DNA的方向，通常将DNA的羟基(—OH)末端称为3′端，而含磷酸基团的末端称为5′端；一个双链DNA分子中含两个3′端和两个5′端，如果一条