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芦荟多糖的粗提取与研究测定 摘 要：本论文对库拉索芦荟中的活性成分——芦荟多糖的应用和发展进行了论述，初步研究了用浸提法提取芦荟多糖的实验条件，如：浸提时间，浸提温度，加入的乙醇的比例，醇沉时间等。本论文还与超声波破碎浸提法提取芦荟多糖的工艺进行了比较，最后得出结论，芦荟多糖提取的最佳条件为：在85℃的浸提温度下，控制料液比为3:1，浸提时间3h，醇沉时间3h。 关键词：库拉索芦荟；芦荟多糖；提取纯化；测定；超声波；控制变量 前 言：芦荟，百合科草本植物，分布极广，作为一种天然药用植物，已有几千年历史，曾被人冠以“万能良药”、“天然美容师”、“天然植物”等美称，而芦荟多糖是一大类大分子化合物，一般是由葡萄糖和甘露糖组成[1]。近几年来，芦荟产品在医药、美容和保健等方面具有绝对的优势，其神奇的功能在理论和使用上均得到验证，芦荟产业初步形成。为了使芦荟的化学成分得到合理有效的利用，使其在新形势下焕发出新的生命力，亟切要求一科学技术为背景的芦荟深加工。芦荟多糖对于提高生物体的免疫力，促进细胞再生和抵抗艾滋病等方面的疗效显著，芦荟多糖还具有抗肿瘤，抗氧化，降血糖，抗疲劳，抗辐射等作用[2]。 美国的一向研究发现芦荟多糖对人体有很好的生物活性作用，正是这项研究引发了众多科学家“植物多糖”的研究，20世纪的生物工程时代也被全世界的科学家称之为“多糖的时代”[3]目前，中国芦荟研究的专家队伍已初具规模，国内从事研究芦荟的机构有了7~8家，如：中国科学院华植物研究所，北京轻工业学院，中国中医研究院等。产品结构也从美容、护肤到饮料、食品、药品等各方各面。但国内关于多糖的研究才刚刚起步，详细工作仍需进一步展开。与此相比，国外如日本，除芦荟化妆品、药品保健品外，还有芦荟茶，芦荟汁等产品，适用性广，与日常生活联系密切。而在美国，芦荟全叶产品则得到了重视。目前积极深入开展的芦荟科研方向有基础研究和应用基础研究，包括芦荟各组成物质的功能，芦荟对细胞生长的作用，芦荟治疗辐射灼伤，烧伤及伤口愈合作用等[4]。 本课题中，研究芦荟多糖提取率的提高，将以往研究的芦荟多糖提取实验优化，提高产率。同时，让小组成员熟练掌握实验仪器操作，该实验需要整个小组的默契与配合能力，熟练的实验仪器操作能力以及精确的分工。芦荟中多糖的提取与测定是从实际出发，与实际相结合，它与人类的日常生活密切相关，对人类的日常生活具有重要的意义。 一、材料与方法 1.1、原材料及来源：新鲜芦荟叶片：库拉索芦荟，自养型；葡萄糖，苯酚（分析纯（A.R）），浓硫酸，95%乙醇。 1.2、仪器与设备：UV—754分光光度计，电热恒温水浴锅，2471—CHA型离心沉淀机，TG—328型分析天平，DHZ—DⅢ型循环水真空泵，102型电热恒温干燥箱，超声波。 1.3、实验方法： 芦荟多糖的粗提取 芦荟鲜叶洗净，去皮，打浆→在芦荟浆中加入蒸馏水，搅拌均匀→抽滤（采用纱布过滤，六层纱布重叠，连续抽滤三次，除去果肉等较大颗粒，清液保留，残渣再提取，合并提取液）→在一定温度下浸提浓缩，将芦荟原浆进行一定时间的浸提，浓缩至原体积的1/3[5]。 （2）芦荟多糖的分离纯化 芦荟多糖的分离纯化首先要求去除蛋白质。常用的去除蛋白质的方法有：Sevag法、三氟三氯乙烷法和三氯醋酸法。这些方法的原理是使多糖不沉底而使蛋白质沉淀，其中Sevag法脱蛋白效果较好，它是用氯仿：戊醇或丁醇，以4:1比例混合，加到样品中振摇，使样品中的蛋白质变性成不溶状态，用离心法除去。 芦荟粗多糖含量的测定 ①葡萄糖标准曲线的制作：取适量的在105℃干燥的葡萄糖103.8mg，加入蒸馏水，定容于100ml容量瓶中。再分别取0.00,0.50,1.00,1.50，2.00,2.50ml葡萄糖溶液，定容于50ml容量瓶中，再各取2ml加入苯酚溶液1ml，迅速加入浓硫酸5ml，混合均匀，静置5min，沸水浴15min，冷却至室温，并于490nm处测量吸光度值。 ②样品中多糖含量的测定：取处理后的样品溶液2.0ml，置于10ml容量瓶中。加蒸馏水定容，吸取上述溶液各2.0ml，按照标准曲线制备方法测定吸光度，另取蒸馏水2.0ml，作为参比溶液。 ③求算粗多糖中纯多糖的含量：通过得到的多个多糖的吸光度值，求出葡萄糖标准曲线的线性回归方程，将吸光度值带入方程即可得到多糖的浓度，从而求出纯多糖的含量，最后算出产率。 结果与讨论 葡萄糖标准曲线绘制 影响多糖提取的4个因素：温度、料液比、浸提时间、乙醇的用量。选取一个，固定其它四个因素做单因素实验,各因素实验的结果如下。 单因素实验结果 1、浸提温度的影响：任选料液比1:4（ml/ml）。用分析纯乙醇为提取剂，取不同的温度进行实验。 图1 浸