1.2基因工程的基本操作程序(个人原创精品2015年)剖析.ppt

三、将目的基因导入受体细胞 四、目的基因的检测与鉴定 四、目的基因的检测与鉴定 3、将目的基因导入微生物细胞的方法 过程： Ca2+处理 大肠杆菌 感受态 细胞 表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA 细菌 Ca2+处理 感受态细胞 小结：将目的基因导入受体细胞 生物种类 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 常用方法 农杆菌转化法 显微注射技术 Ca2+处理法 受体细胞 体细胞 受精卵 原核细胞 转化过程 将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上→农杆菌→导入植物细胞→整合到受体细胞的DNA→表达 将含有目的基因的表达载体提纯→取卵（受精卵）→显微注射→受精卵发育→获得具有新性状的动物 Ca2+处理细胞→感受态细胞→重组表达载体与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA分子 导入过程完成后，全部受体细胞都能摄 入重组DNA分子吗？ 1 真正能摄入重组DNA分子的受体细胞很少。 2 目的基因进入受体细胞后，是否都能稳定表达？ 不一定，需要检测 检测: 是否插入目的基因 是否转录出mRNA 是否翻译出蛋白质 鉴定: 个体生物学水平鉴定 --DNA分子杂交法 --分子杂交法 --抗原-抗体杂交法 1、检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因 方法：DNA分子杂交技术 四、目的基因的检测与鉴定 工具：基因探针 将两种生物的DNA分子的单链放在一起，如果这两个单链具有互补的碱基序列，那么，互补的碱基序列就会结合在一起，形成杂合双链区；在没有互补碱基序列的部位，仍然是两条游离的单链。 1、检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因 四、目的基因的检测与鉴定 基因探针：是一段带有检测标记，且序列已知的，与目的基因互补的核酸序列（单链）。 转基因生 物的DNA 探针 15N 15N 14N 14N 变性 变性 2、检测目的基因是否转录出mRNA 四、目的基因的检测与鉴定 变性 方法：分子杂交技术 探针 15N 15N 转基因生物 的mRNA 14N 14N 3、检测目的基因是否翻译出蛋白质 四、目的基因的检测与鉴定 方法：抗原--抗体杂交技术 提取 苏云金杆菌 Bt毒素蛋白 将Bt毒蛋白注射小鼠体内 从小鼠血管抽出血液分离出抗Bt毒素的抗体 抗体 蛋白质 出现杂交带 脱分化 组织培养 4、生物个体水平的鉴定 四、目的基因的检测与鉴定 鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 没有抗虫基因 的棉植株 有抗虫基因的棉植株 棉铃虫 虫没有死 虫被杀死 没有表达 目的基因表达 包括抗虫、抗病的接种实验，以确定是否有抗性 以及抗性的程度； 个 体 鉴 定 是否成功显示出杂交带 抗原—抗体杂交 目的基因是否翻译出蛋白质 第 三 步 是否成功显示出杂交带 分子杂交技术 目的基因是否转录出mRNA 第 二 步 是否成功显示出杂交带 DNA分子杂交 目的基因是否进入受体细胞 第 一 步 分 子 检 测 结果 方法 检测内容 步骤 类 型 目的基因的表达和检测 感谢您的关注 * 本作品采用知识共享署名-非商业性使用 2.5 中国大陆许可协议进行许可。 专业交流 模板超市 设计服务 NordriDesign中国专业PowerPoint媒体设计与开发 本作品的提供是以适用知识共享组织的公共许可（ 简称“CCPL” 或 “许可”） 条款为前提的。本作品受著作权法以及其他相关法律的保护。对本作品的使用不得超越本许可授权的范围。 如您行使本许可授予的使用本作品的权利，就表明您接受并同意遵守本许可的条款。在您接受这些条款和规定的前提下，许可人授予您本许可所包括的权利。 查看全部… * * 1.2 基因工程的基本操作程序 2014-12-29 一、目的基因的获取 1、目的基因主要是指______________________ 编码蛋白质的结构基因 2、获取目的基因的常用方法有哪些? （1）从基因文库中获取 （2）利用PCR技术扩增 （3）人工合成 1. 从基因文库中获取目的基因 ①基因文库的概念: 将含有某种生物许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因。 ②基因文库的种类: 基因组文库：含有一种生物的全部基因 部分基因文库：只包含了一种生物的部分基因， 如：cDNA文库 某生物体内全部DNA 许多DNA片段 受体菌群体 限制酶 与运载体连接 导入 基因组文库 某种生物某个时期的mRNA cDNA 反转录 受体菌群体 与运载体连接 导入 cDNA文库 基因组文库与cDNA文库 某生物体内全部DNA 许多DNA片段 受体菌群体 限制酶 与运载体连接导入 基因组文库 cDNA 反转录酶 受体菌群体