第十三章 转录第二部分.ppt

二、真核生物的转录 1.染色质和核小体结构对转录有深刻的影响 2.真核细胞RNA聚合酶高度分工 3.启动子以外的序列（顺式作用元件）参与调节基因的转录 4.转录还需要许多被称为转录因子的蛋白质的参与 5.转录与翻译不存在偶联关系 6.转录的产物多为单顺反子，而原核基因的转录产物多为多顺反子 增强子和沉默子 增强子（enhancer）：是一种能够大幅度增强基因转录效率的顺式作用元件。 沉默子（silencer）：与增强子相反，是一种阻止基因表达的顺式作用元件。 作用特性：与启动子不同，其作用与距离、方向和位置均无关；对临近的基因作用最强；某些增强子或沉默子具有组织特异性。 增强子和沉默子的作用特性 （三）转录因子（transcript factor,TF） 反式作用因子：是能直接或间接地识别或结合各种顺式作用元件，参与调控基因转录的蛋白质。顺式作用元件必须由反式作用因子与之结合后才能对转录起调控作用。 转录因子：真核RNA聚合酶不能识别DNA上的启动子，识别这些启动子序列的反式作用因子称为转录因子。 转录因子在转录中主要有两大基本功能：一是作为装配因子或定向因子识别和结合核心启动子，招募RNA聚合酶正确地与启动子结合；其次是调节RNA聚合酶的活性 5’端加帽： 5?端 帽子结构的功能 提高mRNA的稳定性 参与识别起始密码子的过程，提高mRNA的可翻译性 有助于mRNA通过核孔从细胞核运输到细胞质 提高剪接反应的效率。 剪接过程中的两次转酯反应 核酶的发现，对中心法则作了重要补充； 核酶的发现是对传统酶学的挑战； 利用核酶的结构设计合成人工核酶； 生命的起源：“RNA世界”？ 反转录酶含有两个亚基，小亚基是大亚基的特异性水解产物，它的作用是保护大亚基免受水解。 大亚基具有三个酶活性：（1）5‘→3’的依赖于RNA的DNA聚合酶活性，该活性用来催化负链DNA的合成；（2）核糖核酸酶H活性，该活性用来水解RNA引物和基因组RNA；（3）5‘→3’的依赖于DNA的DNA聚合酶活性，该活性用来合成正链DNA。 一、反转录过程 二、转录与癌变 本章小结 RNA转录的一般特征 不对称转录，编码链、模板链 RNA聚合酶及抑制剂（真核、原核） 原核细胞mRNA转录过程 真核细胞和原核细胞mRNA转录的异同 真核细胞m RNA转录后加工 单顺反子，多顺反子 顺式作用元件和反式作用因子 增强子和沉默子的定义 增强子的作用特点 3. mRNA的剪接（RNA splicing） mRNA的剪接：除去hnRNA中的内含子，并将相邻的外显子连接起来，形成成熟的m RNA。 snRNP与hnRNA结合成为剪接体（splicesome） 核内的蛋白质 小分子核糖核酸蛋白体 （snRNP发音为 snurps ） snRNA 参与剪接的主要有：U1-snRNP、 U2-snRNP、 U4-snRNP、 U5-snRNP和U6-snRNP。 ① 剪接体组装过程 剪接供体位点 剪接受体位点 分支点 ② ③ UACUACA - AG UG U4 U5 U6 E1 E2 U1 U2 UACUACA - AG UG U6 E1 E2 U1、U4 无活性的剪接体 U5 激活的剪接体 二、真核细胞tRNA的转录后加工 tRNA前体 RNA pol Ⅲ TGGCNNAGTGC GGTTCGANNCC DNA 目 录 RNAaseP（外切酶）、内切酶 目 录 1.剪切和修剪：核糖核酸酶催化 tRNA核苷酸转移酶、连接酶 ATP ADP 目 录 2. 添加CCA 3.碱基修饰 （2）还原反应 如：U ? DHU （3）核苷内的转位反应 如：U ? ψ （4）脱氨反应 如：A ? I 如：A ? Am （1）甲基化 （1） （1） （3） （2） （4） 目 录 4.酵母Pre-tRNA 的剪接 真核细胞Pre-RNA具有小的内含子 三、真核细胞rRNA 前体的后加工 1)剪切、修剪和修饰 2)剪接 （某些真核生物，如四膜虫） 四膜虫rRNA内含子的二级结构 1.四膜虫rRNA的剪接采用自我剪接方式 5′-端核苷酸序列 四、核 酶 最简单的核酶二级结构——锤头状结构 (hammerhead structure) 通常为60个核苷酸左右 同一分子上包括有催化部份和底物部份 催化部份和底物部份组成锤头结构 除rRNA外，tRNA、mRNA的加工也可采用自我剪接方式。 2.核酶：具有催化性质的RNA 底物部分 3.核酶研究的意义 反转录 Reverse Transcription 反转录酶(reverse transcriptase） ： 以RNA为模板，四种dNTP为底物，依据碱基互补原则指导合成