发酵工程基本操作详解.ppt

发酵工程基本操作 　微生物的培养方法 氧的供需 实验室中，通过摇瓶机往复运动或偏心旋转运动供氧。 中试规模和生产规模的培养装置采用通入无菌压缩空气并同时进行搅拌的方式。 近年来开发出无搅拌装置的节能培养设备，如气升式发酵罐。 细胞对鼓泡通气和机械搅拌产生的剪切作用敏感。 在常压下（20℃）达到平衡时，氧在水中的溶解度仅为6.2ml／L（0.28mmol）。这些氧只能保证氧化8.3mg（即0.046mmol）葡萄糖，仅相当培养基中常用葡萄糖浓度的1‰。 除葡萄糖外，培养基中的无机或有机养料一般都可保证微生物使用几小时至几天。 对好氧菌来说，生长的限制因子几乎总是氧的供应。 只有将培养液装成浅层时，氧才不至于成为限制因子。 提高溶氧速率的措施 在进行液体培养时，一般可通过增加液体与氧的接触面积或提高氧分压来提高溶氧速率， 具体措施有： ①浅层液体培养； ②利用往复式或旋转式摇床（shaker）对三角瓶培养物作振荡培养； ③在深层液体培养器的底部通入加压空气，并用气体分布器使其以小气泡形式均匀喷出； ④对培养液进行机械搅拌，并在培养器的壁上设置阻挡装置。 在实验室进行好氧菌培养的具体方法 （1）试管液体培养装液量可多可少。此法的通气效果一般均不够理想，仅适合培养兼性厌氧菌。 （2）三角瓶浅层培养在静止状态下，三角瓶内的通气状况与其中装液量和棉塞通气程度对微生物的生长速度和生长量有很大的关系。此法一般也仅适宜培养兼性厌氧菌。 （3）摇瓶培养 即将三角瓶内培养液用8层纱布包住瓶口，以取代一般的棉花塞，同时降低瓶内的装液量，把它放到往复式或旋转式摇床上作有节奏的振荡，以达到提高溶氧量的目的。 （4）台式发酵罐体积一般为几升至几十升，并有多种自动控制和记录装置。 氧的性质及发酵液中实际需氧量 难溶气体，在25度和105 Pa时，氧在纯水中的溶解度为0.25mol/m3 。 对于发酵液中每小时在1 m3 培养液中需要氧是溶解量的750倍。如果中断供氧，菌体会在几秒钟内耗尽溶氧。 细胞对氧的需求 氧作为受氢体 氧直接参与一些生物反应 微生物的吸氧量 常用呼吸强度和耗氧速率表示。 呼吸强度：单位质量的干菌体在单位时间内所吸取的氧量，QO2 ，表示微生物的绝对耗氧量。 耗氧速率：单位体积培养液在单位时间内的吸氧量，r。 二者关系：呼吸强度表示微生物的绝对吸氧量，但当培养液中有固体成分存在时，测定困难。用耗氧速率表示。 r= QO2 c(X) c(X) 发酵液中菌体的浓度 在培养过程中不需要使溶解氧浓度达到或接近饱和值，而只要超过某一临界氧浓度即可。 当不存在其他限制性基质时，如果溶氧浓度高于临界值，细胞的比耗氧速率保持恒定； 如果溶氧浓度低于临界值，细胞的比耗氧速率大大下降，这时细胞处于半厌氧状态。 临界溶氧浓度 满足微生物呼吸的最低氧浓度。在临界氧浓度以下，微生物的呼吸速率随溶解氧浓度降低而显著下降。 好氧微生物临界氧浓度大约是饱和浓度的1-25％。 发酵对溶解氧的影响 培养基的成分和浓度显著影响耗氧。 菌龄 菌体的耗氧量 溶氧高发酵条件最适条件下发酵或排除有毒代谢产物培养加有利于菌体的生长和产物合成，但溶氧太大有时反而抑制产物的形成。 需考查每一种发酵产物的临界氧浓度和最适氧浓度。 最适溶氧浓度的大小与菌体和产物合成代谢的特性有关。 供氧与微生物呼吸代谢的关系 好氧微生物所含的氧化酶系：过氧化氢酶，细胞色素氧化酶，黄素脱氢酶，多酰氧化酶等。 不同好氧微生物所含的氧化酶系的种类和数量不面，在不同环境条件下，各种微生物的吸氧量或呼吸强度不同。 对微生物供氧的传递过程 空气中的氧(氧溶入液体的传递速度)——液体中的溶氧(氧由液体至微生物的传递速度)——微生物体内的氧(氧的利用速度)——产物 在氧的传递过程中液膜阻力是控制因素。 为了供给微生物必需的氧量，必须注意发酵罐的类型及运转以维持所要求的Kla。 一 双膜理论的基本前提 （1）在气泡与包围着气泡的液体之间存在着界面，在界面的气泡一侧存在着一层气膜，在界面的液体一侧存在着一层液膜。气膜内的气体分子和液膜中的液体分子和液膜中的液体分子都处于层流状态，分子间无对流运动，因此氧的分子只能以扩散方式，即籍浓度差而透过双膜。 另外，气泡内除开气膜以外的气体分子，处于对流状态，称为气体主流，在空气主流空间的任一点，氧分子的浓度相同，液体主流中也是如此。 （2）在双膜之间的界面上，氧气的分压强与溶于液体中的氧的浓度? （3）传质过程处于稳定状态，传质途径上各点的氧的浓度不随时间而变。 氧传递的动力和阻力 在氧从气泡传递到细胞内要克服一系列的阻力，相对大小取决于流体力学特性、温度、细胞活性和浓度、液体的组成、界面特性以及其他因素。 传递过程的总推动力是气相与细胞内的氧