叶绿体中色素的提取与分离实验详解.ppt

绿色植物色素的提取与分离 刘向阳 陈李雄 【实 验】 一、实验原理 1.叶绿体中的色素能溶解在丙酮（有机溶剂:酒精、汽油、苯、石油醚等）中，所以用丙酮可提取叶绿体中色素。 2.色素在薄层层析液上的扩散的速度不同，溶解度高的色素分子随层析液在薄板上的扩散得快，溶解度低的色素分子随扩散液在薄板上的扩散得慢，因而可用层析液将不同的色素分离。 二 实验步骤 1. 提取叶绿素 研磨法提取光合色素 材料剪碎 研磨法 加入有机溶剂 研磨、匀浆 过滤 提取液 2 色素的鉴定 （1）薄层板的制备： 称取2～5g层析用硅胶，加适量水调成糊状，等石膏开始固化时，再加少许水，调成匀浆，平均摊在两块5.0×15cm的层析玻璃板上，再轻敲使其涂布均匀。 放置2天固化后，，贮于干燥器内备用。 （2）点样。 在层析板下端2.0cm处，（用铅笔轻化一起始线，并在点样出用铅笔作一记号为原点。）取毛细管，分别蘸取上一步的提取液，点于原点上，（注意点样用的毛细管不能混用，毛细管不能将薄层板表面弄破，样品斑点直径在1~2mm为宜！斑点间距为1cm）点3个点。 3 展开、显色 叶绿体中色素的对比 项目 色素颜色 吸收光谱主要部位 定性滤纸上显现的色素层析图谱 叶绿素 （占3／4） 叶绿素a 蓝绿色 红光、蓝紫光 位于中下层，呈蓝绿色 叶绿素b 黄绿色 红光、蓝紫光 位于最下层，呈黄绿色 类胡萝卜素 （占1／4） 胡萝卜素 橙黄色 蓝紫光 位于最上层，呈橙黄色 叶黄素 黄色 蓝紫光 位于中上层，呈黄色 三、注意事项 1.因丙酮和层析液都是易挥发且有一定毒性的有机溶剂，所以研磨要快，收集的滤液要用棉塞塞住，层析时要加盖，尽量减少有机溶剂的挥发。 2.分离色素时，一定不要让薄板条上的三个点接触到层析液，这是因为色素易溶解在层析液中，导致色素带不清晰，影响实验效果。 3 在叶绿体色素的提取和分离实验中： （1）研磨绿叶时为防止叶绿素被破坏而加入CaCO3的原理是中和细胞中的有机酸。 （4）所画滤液细线越细越齐越好，这样可避免 色素带部分重叠 以取得较好的分离效果。 （5）层析装置加盖的目的是避免层析液挥发影响效果并引起中毒。 （6）滤纸条上色素带最宽的颜色是蓝绿色，相邻色素带间距离最近的是叶绿素a与叶绿素b。