基因工程细胞工程胚胎工程流程图详解.pptVIP

某种生物 （所有或部分DNA) 限制酶 多个DNA片段 多个重组DNA 受体菌的不同个体 分别导入 DNA连接酶 载体 群体（基因组或部分基因文库） （不同个体含不同DNA片段） （同种限制酶切割） 1.从基因组文库中提取目的基因 目的基因的制备： PCR技术 DNA复制 过程 DNA变性（90～95℃）→退火（复性55~60℃）→子链延伸（70~75℃）→重复循环 DNA复制起始，RNA引物形成→DNA片段生成→RNA引物水解→完整的DNA分子形成 相同点 原则 碱基互补配对 条件 模板、原料（dCTP、dATP、dGTP、dTTP）、能量、酶、引物等 不同点 解旋方式 氢键在高温下断裂，双链全部解开 解旋酶催化氢键逐步断裂 场所 体外 主要在细胞核中 引物 DNA RNA 酶 热稳定DNA聚合酶（Taq酶） 解旋酶、DNA聚合酶、DNA连接酶等 结果 在短时间内形成大量的DNA片段 形成完整的DNA分子 2.利用PCR技术扩增目的基因 (1)反转录法： 以目的基因转录成的信使RNA为模板，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需的基因。 目的基因的mRNA 杂交双链 (单链RNA/单链DNA) 单链DNA 反转录酶 DNA聚合酶 双链DNA (目的基因) 3、人工合成目的基因（DNA合成仪） 已知核苷酸序列，且基因较小，也可通过DNA合成仪用化学方法直接人工合成。 (2)根据已知的氨基酸序列合成DNA法 ： 根据已知蛋白质的氨基酸序列，推测出相应的信使RNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测出它的结构基因的核苷酸序列，再通过化学方法，以单核苷酸为原料合成目的基因。 蛋白质的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 基因的核苷酸序列 推测 推测 目的基因 化学合成 蛋白质的氨基酸排列顺序可以用测序仪自动完成。 如何构建？ 导入的方法？ 如何检测？ 进行细胞培养 1.基因工程流程图： （重组DNA分子导入农杆菌，再让农杆菌感染植物细胞） 1. 目的基因导入植物细胞 农杆菌转化法： 基因枪法： 花粉管通道法 双子叶+裸子植物 单子叶 生出转基因动物 基因表达载体 显微注射仪 注入 受精卵 早期胚胎 移植 输卵管或子宫中发育 发育 大肠杆菌 Ca2+ 处理 感受态细胞 （易吸收DNA的生理状态） 基因表达载体 缓冲液 转基因生物 适宜温度 混合培养 3.目的基因导入 微生物细胞 2、目的基因导入动物细胞（常用受精卵） 2.蛋白质工程流程图： 蛋白质 三维结构 氨基酸序列 多肽链 基因 DNA 预期功能 DNA合成 分子设计 mRNA 生物功能 转录 翻译 折叠 光下培养 愈伤组织 胚状体或丛芽 植物体 脱分化 再分化 离体的植物组织或细胞 发育 避光培养 1、植物组织培养技术 营养、激素 营养、激素 杂种植株 融合的原生质体AB 再生出细胞壁 脱分化 愈伤组织 再分化 2.植物体细胞杂交技术 1.植物细胞的融合 2.植物组织培养 植物细胞A 原生质体B 原生质体A 杂种细胞AB 去 壁 人 工 诱 导 融合完成的 标志 植物细胞B 去壁 --酶解法 融合内容：膜、质、核的融合。 物理法 化学法 （筛选出杂种细胞） 融合原理：膜的流动性； 1.动物细胞培养培养过程： 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 胰蛋白酶处理 剪刀剪碎 单个细胞 加培养液 制成 细胞悬浮液 不死细胞 原理：细胞增值 无限传代 作用：去掉组织间蛋白质 部分细胞遗传物质改变 原代培养 随细胞数增多，细胞分裂贴壁生长到表面相互接触时就会停止分裂增殖——细胞接触抑制 传代培养 动物细胞培养条件 1、无菌、无毒的环境: （添加一定量的抗生素，定期更换培养液.） 2、营养: （葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、维生素、动物血清等。） 3、温度和PH: 36.5+（-）0.5度, 7.2-7.4 4、气体环境（注意作用） O2和CO2（95%空气和5% CO2 ） O2是细胞代谢的需要， CO2是维持培养液的PH值 细胞质 某种生物（供体） MⅡ期的卵母细胞 体细胞 细胞核 早期胚胎 卵裂 重组细胞 细胞培养 受体（代孕）母体子宫 胚胎移植 与供体生物遗传物质相同的个体 分娩 妊娠 2.克隆动物产生的过程： 不同DNA的两个细胞A和B 灭火的病毒等 融合的细胞（两个核） 杂交细胞（单个核） 有丝分裂 3.动物细胞融合 杂交细胞的特点是什么？ 第二次筛选 能产生特定抗体、培养条件下能无限增殖的杂交瘤细胞 杂交细胞 灭活的病毒等手段 小鼠骨髓瘤细胞 B淋巴细胞 经免疫的小鼠 提取 杂交瘤细胞 第一次筛选 用特定的选 择性培养基 体外培养 注射到小鼠腹腔 提取单克隆抗体 克隆化培养和抗体检测 比