验证指导原则实施细则(改后定稿).docVIP

中药分析方法验证指导原则实施细则 一、准确度： 准确度一般采用加样回收试验进行评价。可采用下列两种方法： 1、同一样品，制备相同浓度的6份供试品（样品取样减半，以1：1比例加入对照品）； 2、同一样品，制备3个浓度的供试品，每个浓度分别制备3份供试液 对照品的加入有以下三种方式： （1）取相同量的样品9份（一般为质量标准中供试品取样量的一半），按三种比例加入对照品，设计 3种加样浓度。中间浓度加入量应按1：1比例，高低浓度可选0.5：1、1.5：1的比例。加入的对照品的量要适当，一般不得少于或多于供试品中含有量的1倍（即在1：2和2：1）之间。 （2）取3种不同取样量的供试品，每个取样量各3份，建议结合范围的考察设计成3种浓度。中间浓度应在选定的中间点上，取其半量再按1：1比例加入对照品，其他两个浓度可以选择范围的最高、最低点进行测定。 （3）、按标示量计算的组分，其准确度的验证可参照化学药，取3个不同浓度9份样品（样品浓度减半，按0.8：1、1：1、1：1.2的比例加入对照品） 一般应满足以下规定，回收率在95～105％之间， 相对标准偏差（ RSD%）TLCS＜5%，HPLC/GC＜3%。 二、精密度： （一）、重复性：以下几种方法可选择使用，一般应满足以下规定， 相对标准偏差 RSD% TLCS＜5%，HPLC/GC＜3%。 1、测定同一浓度6份样品的含量 2、测定3个不同浓度9份样品的含量（三个不同浓度，每个不同浓度分别制备3份供试品溶液） 高低浓度可以结合范围的考察设计，中间浓度为样品平均浓度，计算9份样品的相对标准偏差。 （二）、中间精密度： 建议考察不同分析人员和不同设备，至少3人用同一设备或同一人用3台不同设备，对同一批（或同一份）样品测定含量。计算不同操作者或不同设备的相对标准偏差。 不能仅考察不同分析时间的结果，有重现性考察的，可以免做中间精密度。 （三）、重现性：应由起草单位根据复核所的复核数据，报送两个实验室之间的相对偏差。 三、专属性： 空白实验一般为除去待测药味，按制法制成空白样品，再按正文方法同法操作制成。 测定成分同时为2种以上药材含有的建议分别做每一药的空白再做减去2味以上的空白。 （一）、薄层鉴别：目测无相应斑点为判定标准。 （二）含量测定及限量检查： 1、复方制剂可仅提供空白实验的考察数据，同时提供峰纯度检查的考察数据更好。空白样品色谱图在相应保留时间（或位置）应无色谱峰，若有色谱峰出现，色谱法（GC/HPLC/TLCS）中一般干扰峰面积在5％以下可认为干扰可忽略不计。 2、单味药材应作峰纯度检查。 四、检测限：用已知浓度的对照品进行实验； 1、直观法：一般用于非仪器分析方法。在薄层板上点不同量的对照品，以目测斑点可检出的最小量为准。 2、信噪比法：先进空白溶剂，测出噪音，再进样已知浓度的对照品，根据其对应的峰高值，将对照品溶液稀释至约3倍信噪比的浓度，即为检测限。 五、定量限：信噪比法：先进空白溶剂，测出噪音，进已知浓度的对照品，根据其对应的峰高值，将对照品溶液稀释至约10倍信噪比的浓度，重复进样5～6次，计算峰面积的相对标准偏差，规定TLCS＜3%，HPLC/GC＜2%，若偏差太大，应重新配制合适浓度的对照品溶液，进样，计算相对标准偏差。此浓度即为定量限。 六、线性： 用已知浓度的对照品进行实验，要求制备系列浓度的溶液，进样同样体积或制备同一浓度的对照品溶液，改变进样体积作线性； 线性中的浓度范围至少作10倍，应大于范围中的高低限浓度区间，计算相关系数，要求： TLCS：R＞0.99，HPLC-UV：R＞0.999，HPLC-ELSD：R＞0.995。 七、范围：范围是指能达到一定的精密度、准确度和线性，测试方法适用的高低限度或量的区间。根据每个品种具体情况确定。尽量覆盖日后样品可能的含量范围。在操作过程中除取样量和进样量可改变外，一般不得改动实验操作中的规定如溶剂体积、提取时间、萃取次数等。如实验结果证明的范围区域不合适，应根据样品情况改变考察区域或改变标准中样品的前处理条件，使适合日后样品可能的含量范围。如以后发现考察范围过小可通过实验数据扩大。 要求至少根据准确度的考察数据确定范围的高低点，且每个浓度至少有6份测定数据，计算高低点的相对标准偏差，并满足以下规定TLCS＜5%，HPLC/GC＜3%。 含量限度有上下限的，一般设定范围低限为含量限度下限的50～70％，范围的高限为含量限度上限的130～150％。 含量限度仅有低限的，一般设定范围为含量限度的50％～70％至含量限度的2～5倍以上。 以标示量表示的，可参照化学药， 一般设定范围为标示量的80％～120％。 八、耐用性： （一）、TLC：考察主斑点的分离度和拖尾情况，以下各项考察均应提供薄层色谱照片。 1、薄层板：至