植物组织培养技术课件 苏教版选修1.ppt

1、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌） 2、外植体的消毒（酒精、氯化汞） 3、接种的无菌操作（酒精、酒精灯——灼烧） 4、无菌箱中的培养； 5、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。 在整个操作过程中，是如何来实现无菌环境的？ 植物组织培养的应用 （1）微型繁殖 （2）作物脱毒 （3）人工种子 （4）单倍体克隆(花药离体培养) 繁殖速度快、不受季节影响、保持优良性状 取材：植物分生区组织（如茎尖） 原因：病毒极少，甚至无病毒 胚 状 体 人工种皮 人工胚乳 （5）突变体的利用 （6）细胞产物的工业化生产（此生代谢产物如某些中药） 从细胞培养产生的表现出遗传变异的新植株中，选择了具备有益农艺性状的作物新类型； 在培养基中加入不同浓度的NaCl或病原体的毒蛋白，诱发和筛选了抗盐或抗病突变体； 在培养基中加入不同浓度的赖氨酸类似物，能够产生赖氨酸类似物突变体，其中赖氨酸和异亮氨酸的水平升高。 将含有愈伤组织的培养物的试管放在摇床上， 通过液体悬浮培养可以分散成单个细胞， 改变培养基成分即可进行细胞培养 紫草 紫草素 愈伤组织 （6）细胞产物的工业化生产 1、概念： 植物组织培养就是在无菌和人工控制条件下，将离体的植物器官、组织、细胞，培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其产生愈伤组织,进而生根发芽，最终形成完整的植株。 为什么植物的一个细胞就可以培育出完整的植株呢？ 1）含义： 高度分化的植物细胞，仍然具有发育成完整个体的潜能 2）原因： 生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质，都有发育成为完整个体所必需的全部基因，从理论上讲，生物体的每一个活细胞都应该具有全能性。 3）差异： （1） 受精卵的全能性最高 　　　一般受精卵生殖细胞体细胞 2、细胞的全能性 （3）植物细胞动物细胞 （2）分化程度低的细胞分化程度高的细胞 为什么植物的花瓣在植物体内没有能发育成完整的植株呢？ Ａ．细胞失去了全能性　　　　　　　　Ｂ．细胞中的基因部分丢失 Ｃ．细胞中的基因进行选择性表达　　　　　　Ｄ．细胞中的基因变异不同 ★ 怎样才能由一个细胞或组织通过培养得到一株完整植株, 应该如何操作? 切取 形成层 无菌接种 诱导愈伤组织 的形成 试管苗的形成 培养室 移栽 脱分化 再分化 植物组织培养举例 植物组织培养技术实验成功关键 无菌技术 避免杂菌在上面迅速生长消耗营养 有些杂菌会危害培养物的生长 脱分化: 再分化: 愈伤组织: 让已经分化的细胞,经过诱导后,失去其特有的结构和功能而转变成未分化细胞的过程。 由一团排列疏松而无规则,高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞团组成的新生组织。 通过调节营养物质和生长调节剂的适当配比，从愈伤组织诱导出芽和根的顶端分生组织的过程。 ③ ① ② 细胞分裂素和生长素诱导愈伤组织的分化 左：培养基中生长素含量较高，仅有根的形成（生根培养基）； 右：培养基中含高比值细胞分裂素/生长素，则仅有芽的形成。 3、植物组织培养的基本过程 离体器官或组织 植物体 脱分化 细胞分裂素≈生长素 愈伤组织 芽 根 细胞分裂素生长素 细胞分裂素生长素 再分化 不需要光 需要光 二、影响植物组织培养的因素： 1、外植体的选取 不同植物的组织培养难度不同 烟草和胡萝卜的组织培养较容易, 而枸杞的组织培养难诱导。 同一种植物的不同组织培养难度不同 菊花组织培养,一般选取未开花植 物的茎 2、培养基的配制(MS培养基) 大量元素：C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S 微量元素：B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co 有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等 植物激素：生长素、细胞分裂素、赤霉素等 讨论：你能说出各种营养物质的作用吗？同微生物培养基的配方相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？ 答：微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需的无机盐；蔗糖提供碳源，同时能够维持细胞的渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。 微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不同，MS培养基则需提供大量无机营养，无机盐混合物包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类。 3、不同植物激素使用顺序 使用顺序 实验结果 先生长素， 后细胞分裂素 有利于细胞分裂但不分化 先细胞分裂素， 后生长素 细胞既分裂也分化 同时使用 分化频率提高 4、不同植物激素使用量 生长素/细胞分裂素比值 结果 比值高时 促根分化， 抑芽形成 比值低时 促芽分化