现代生物技术在发酵中的应用.ppt

提高次级代谢产物产量的方法？ ★★★★★ 答：1）补加前体类似物； 2）加入诱导物； 3）防止碳分解代谢阻遏或抑制的发生； 4）防止氮代谢阻遏的发生； 5）筛选耐前体或前体类似物的突变株； 6）筛选抗抗生素突变株； 7）筛选营养缺陷型的回复突变株； 8）抗毒性突变株的选育。 试述提高初级代谢产物产量的方法？ ★★★★★ 1)使用诱导物； 2)除去诱导物----选育组成型产生菌； 3)降低分解代谢产物浓度，减少阻遏的发生； 4)解除分解代谢阻遏------筛选抗分解代谢阻遏突变株； 5)解除反馈抑制-------筛选抗反馈抑制突变株； 6)防止回复突变的产生和筛选负变菌株的回复突变株； 7)改变细胞膜的通透性； 8)筛选抗生素抗性突变株； 9)选育条件抗性突变株； 10) 调节生长速率； 11) 加入酶的竞争抑制剂。 （4）植物细胞大量培养的应用 植物细胞培养技术主要用于种苗的生产和次级代谢产物的生产。前者属于植物繁殖问题，后者属于工业化生产植物产物的问题。这里只简单介绍后一方面。 该技术的发展，使得植物细胞象微生物细胞一样，利用发酵罐来生产过去只能从植物提取的一系列产品。例如，药用植物的有效成分、香料、蛋白酶抑制剂等重要商品。其培养过程象微生物发酵一样，包括三个步骤：a. 细胞株建立，包括愈伤组织的培养，愈伤组织经单细胞分离出的优良无性繁殖系，经摇瓶培养所得的游离细胞，供作种子； b. 扩大培养，种子细胞经多次扩大繁殖后，供作发酵接种材料；c. 大罐培养，发酵生产所要的植物产品。 利用这种技术所得的次级代谢产物的含量比原植物株要高得多。例如，人参的冠瘿细胞、愈伤组织和再分化的根在琼脂培养基和液体培养基中培养几周，所得的粗皂苷的含量分别为21%、19.3%和27.4%，而天然根中的含量仅为4.1%。1968年人参细胞培养的工业化生产达到18m3的规模。紫草素和小蘖碱的生产也已达到实用化水平，其中作为高级染料和治疗药物的紫草素含量达55%~65%，而天然紫草根的抽提液仅22%~52%，药源还困难。因此这种培养技术得到蓬勃发展，已成为当代生物技术的一个重要组成部分 植物细胞培养已显示出诱人的前景。 三. 固定化细胞发酵 1 .概述 酶工程是生物技术的一个组成部分，包括酶（或细胞）的固定化技术及其应用，酶常常是不稳定的，又不易重复使用，但固定化后的酶则显示出稳定性明显提高、可以重复（或连续）使用的优点。所以，出现了包括具催化功能的固定化酶和固定化细胞的“固定化生物催化剂”。由于固定化酶（或细胞）具有简化生产工序、降低成本、节约原材料和能源、提高产量和收率以及改善环境污染的能力，所以在各个领域中，已得到广泛的应用。 ? 固定化技术与发酵技术的比较 在发酵工程中，使用固定化细胞代替游离细胞就像固定化酶代替游离酶一样，具有如下的优点： a. 分批发酵可用固定化细胞进行连续反应来代替； b.可以利用高密度的固定化细胞集合体进行发酵，反应效率大大提高； c.可以人为地控制固定化细胞的生理状态，因为许多化谢产物（或酶）仅仅在细胞的静 止期才能形成，所以有利于产物的形成。发酵液的体积也大大减小。 由于上述优点，固定化细胞发酵已代替许多利用连续酶反应的常规工业操作，在某些领域中，已（或将）取代一些传统发酵技术，如已用于甾类激素转化、氨基酸生产和酒精生产等领域。 固定化细胞与固定化酶相比，虽与反应系统有关，仍具有以下优点： a. 固定化细胞可以免除固定化酶需要的酶的提取和精制步骤； b. 固定化细胞系统对外界条件（如pH）变化的敏感性不强，故有利于控制反应； c. 固定化细胞允许有高负荷的载体，而载有固定化酶的载体，由于蛋白-蛋白之间的相 互作用，可使酶活下降； d. 如果反应系统需要许多酶和辅因子再生。采用固定化细胞则是最好的选择。 目前，已经形成了固定化细胞技术，并已转向重点研究固定化细胞的特性、反应器的选项择和应用。固定化细胞的种类，也从原来的微生物细胞扩大到动物细胞、植物细胞以及DNA重组技术和细胞融合技术所组建的细胞。 2. 固定化细胞的特性 细胞的固定化方法很多。但任何一种限制细胞自由流动的技术，都可用于制备固定化细胞。根据已有的资料，固定化细胞的制备方法大体可分为吸附法、包埋法、共价结合法、交联法、多孔物质包络法、超过滤法等几大类。其中以包埋法使用最为普遍，有使用聚丙烯酰胺凝胶、海藻酸钙凝胶、卡拉胶、琼脂糖胶等的凝胶包埋法和用半通透性聚合物薄膜将细胞包裹起来，形成微型胶囊的微胶囊法2种。