细胞工程(第三章).pptVIP

* * 第三章 植物细胞工程基本原理和技术 细胞全能性及其表达 植物细胞培养所需营养和环境条件 外植体的接种培养 主要内容 第一节 细胞全能性及其表达 一个活细胞所具有产生完整生物个体的潜在能力称之为细胞的全能性。 理论上，任何动、植物细胞都具有全能性。 实际上，对于动物细胞而言，只有部分干细胞和经过核移植的体细胞体现出了全能性；对于植物细胞而言，大部分植物的体细胞在合适的培养条件下都可以体现出全能性。 第一类 茎尖、根尖及形成层细胞，这类细胞始终保持分裂能力，从一个周期进入另一个周期，为周期细胞。 第二类 筛管、导管、气孔保卫细胞等特化细胞，他们为永久失去分裂能力的细胞，为终端分化细胞。 第三类 表皮细胞及各种薄壁细胞，这类细胞在通常情况下不分裂，但在受到外界刺激后可重新启动分裂，称为G0细胞。 植物细胞的分类： 基本概念： 脱分化(dedifferentiation) —— 已经停止分裂的成熟细胞转变为分生状态，并形成未分化的细胞团或愈伤组织的现象。 愈伤组织（callus）—— 指植物体的局部受到创伤刺激后，在伤口表面新生的组织。它由活的薄壁细胞组成，可起源于植物体任何器官内各种组织的活细胞。 再分化（redifferentiation) —— 已经分化的细胞经过脱分化后再次分化形成器官或植株的现象。 新疆紫草细胞愈伤组织 体细胞胚(embryoid) —— 植物组织培养中，起源于非合子细胞，但经过胚发生和胚胎发育形成类似于合子胚结构的胚状体。包括二倍体胚、单倍体胚和三倍体胚。 刺五加体细胞胚 植物激素： 植物激素是植物体内合成的对植物生长发育有显著作用的微量有机物质，也被成为植物天然激素或植物内源激素。 植物激素有五类，即生长素（Auxin）、赤霉素（GA）、细胞分裂素（CTK）、脱落酸（ABA）和乙烯（ethyne，ETH）。 生长素和细胞分裂素对根、芽分化的影响。 第二节 植物细胞培养所需营养和环境条件 一、 培养基的组成和配置 1. 培养基的基本成分 植物组织培养中应用的培养基，主要由无机成分、有机化合物、生长调节剂三部分。 主要生理作用： 组成各种化合物，参与机体的建造，成为结构物质； 构成一些特殊的生理活性物质，如酶以及酶的活化剂，参与植物的代谢活动； 元素之间相互协调，以维持离子浓度平衡、胶体稳定、电荷平衡等生物电化学方面的作用； 在发育过程中，影响组织器官的建成。 无机成分 糖类 既可作为C源，又可维持培养基的渗透压。植物组织培养中常使用蔗糖，在某些特殊培养类型中，亦使用麦芽糖、葡萄糖、果糖、纤维二糖、甘露糖等。 维生素 为了使培养物生长得更好，根据培养目的不同常在培养基中添加一种或多种维生素。常用的维生素包括VB1（盐酸硫胺素）、VB6（盐酸吡哆醇）、Vpp(烟酸)、VH (生物素)、VBc（叶酸）、VB5（泛酸钙）等。 有机成分 肌醇 化学名称环己六醇。肌醇本身并没有促进生长的作用，但它在糖类的相互转化、维生素、激素的利用方面具有重要的促进作用，所以它能使培养物快速生长，对胚状体和芽的形成有良好的影响。 腺嘌呤 腺嘌呤是合成各种细胞分裂素的前体之一，外源添加腺嘌呤有利于细胞协调自身合成细胞分裂素，有利于细胞的分裂和分化，促进芽的形成和生长。 氨基酸 氨基酸是蛋白质的组成成分。常用的氨基酸为甘氨酸及多种氨基酸的混合物如水解酪蛋白、水解乳蛋白等。 植物激素 生长素在植物体中的合成部位是叶原基、嫩叶和发育中的种子。在植物组织培养中，生长素主要用来诱导细胞分裂和根的分化。在植物组织培养中常用的生长素有：NAA（萘乙酸），IAA（吲哚乙酸），IBA（吲哚丁酸），NOA（萘氧乙酸），2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）等。 NAA由人工合成的，与IBA相比，NAA诱发根的能力较弱，诱发的根少而粗；IBA在根的诱导与生长上作用强烈，作用时间长，诱发的根多而长，效果较好。IBA是天然合成的生长素，可光解或被酶所氧化，所以在使用浓度上应相对较高。对愈伤组织增殖最有效的是2,4-D，但2,4-D是一种器官发生抑制刘，不能用于启动根和芽分化的培养基中。 (1) 生长素 (2) 细胞分裂素 细胞分裂素是腺膘吟的衍生物。细胞分裂素在植物生长发育的各个时期均可表现出它的调节作用，可以影响植物体内的物质运输，可以调控细胞器的发生，还可以打破某些植物种子的休眠和延缓叶片衰老。细胞分裂素可与细胞膜和细胞核结合，影响细胞的分裂、生长与分化。 在组织培养中使用细胞分裂素的主要目的是刺激细胞分裂，诱导芽的分化、叶片扩大和茎长高，抑