鼻咽癌的基因變化.docVIP

鼻咽癌的基因變化 　　癌症是一種基因疾病，就像大部分的癌症，鼻咽癌也因很多步驟的基因變化累積而形成，其中包括致癌基因的活化及抑癌基因的去活化等。要解開致癌之謎的第一步，首先要了解癌症的基因產生何種變化，然後再縮小範圍，針對有問題的基因，進一步深入分析。致癌基因的活化會表現出基因增加的現象；抑癌基因的去活化，可因基因缺失所致，因此看一種癌症基因的增加與減少，可推測那些致癌基因及抑癌基因參與致癌過程。比較型基因組雜交法 comparative genomic hybridization, CGH 在一次的實驗，可得知23對染色體上基因的增減情形，提供一個整體，比較大範圍的基因變化全貌。 　　鼻咽癌經CGH實驗後，發現主要有以下的變化：基因增加出現於染色體12p 59% ，1q 47% ，17q 47% ，近中央節的11q 41% ，12q 35% ，9q 24% 及8 24% ；基因缺失的有染色體3p 53% ，9p 41% ，13q 41% ，14q 35% ，靠遠端的11q 29% ，5q 25% 及16q 19% 。比較台灣和香港鼻咽癌的結果，發現兩者最主要的差異是，前者9q的基因增加較多，沒有基因減少的情形；11q，17q基因增加的情形較多。而後者9q少有基因增加的情形，卻高達60% 12/20 有基因缺失；11q，17q少有基因增加，反而是19，20有較多基因的增加。可見兩地鼻咽癌的基因變化還是有差異，雖同是華裔，還是有不同點。共同點是1q，8，12有基因增加；3p，9p，11q，13q，14q有基因缺失[1,2]。 　　重要的是，有基因缺失的染色體目前已知有很多抑癌基因，如9p21有MTS1 multiple tumor suppressor 1 /p16和MTS2基因；11q21-23有ATM基因；3p14.2有FHIT fragile histidine triad ；5q21有APC；16q22.1有E-cadherin基因。但3q12的BRCA2及13q14的RB1，並不在鼻咽癌13q21-32的缺失處；p53所在的17p13，在鼻咽癌也沒有缺失，這和絕大部分的報告，鼻咽癌並沒有RB及p53基因的突變或其他變化相符合。另外利用PCR-single strand conformational polymorphism SSCP 及序列分析，發現p53基因作用過程的下游基因p21，又名WAF-1及CIP-1，也沒有點突變的現象，顯示RB及 p53基因的去活化，在鼻咽癌的致病過程並不重要[3]。有基因增加的染色體有致癌基因的有：11q13的CCND1 cyclin D1 和INT2；2p12.1有RASK；12p13有CCND2和TEL；12p有PTHLH parathyroid hormone-related polypeptide ；12q有CDK4、INT1、MDM2；8q24有c-MYC等一些致癌基因。 　　為了進一步了解鼻咽癌細胞染色體上更小區段的缺失，藉助看失異合性 loss of heterozygosity, LOH 的情形，可得知更詳細、更精確的基因缺失現象。因為每對同源染色體當中，一條來自父親，一條來自母親，其中有很多多形標記，可區分何者來自父親，何者來自母親，所以有異合性 heterozygosity ，由於抑癌基因的去活化最常見於，一等位基因的缺失加另一等位基因的點突變，如果兩同源染色體之一有一段基因缺失，謂之失異合性。以前利用有多形性，含有許多重複序列的微衛星標記 microsatelite marker ，附上放射性同位素於引子，經PCR、電泳、曝光，比較正常細胞和癌細胞的多形標記，如果癌細胞有一條標記不見了，或是含量是正常細胞的一半以下，謂之有LOH，表示該標記所在染色體區段附近，可能有重要的抑癌基因，因細胞失去該基因，加上另一等位基因有點突變而致癌。由於使用同位素較麻煩、費時，所以斷斷續續出現報告，指出鼻咽癌在第3，9，11，13，14對染色體有LOH，尤其9p21-22有純合性缺失 homozygous deletion [4]。後來有附上不同顏色的螢光標記，藉助電腦化，可以安全又快速處理龐大資料，所以可以做全基因組的失異合性定位，利用含有三種螢光之一，分布於23對染色體上的382個微衛星標記，進行複合式PCR multiplex PCR ，一支反應試管可放入多個標記的引子，電泳時同一電泳槽可放入同長度、不同顏色，或不同長度、同顏色的標記，經雷射激光，電腦紀錄、判讀，可比傳統同位素法快上幾十倍，結果發現鼻咽癌失異合性的比率依次是：3p 96.3% ，9q 88.9% ，9p 85.2% ，14q 85.2% ，11q 74.1% ，12q 70.4% ，13q 55.6% ，1