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实验二细菌单染色及革兰氏染色法
* 微生物学实验 冯 新 细菌单染色及革兰氏染色法 实验三 一、实验目的 学习细菌的革兰氏染色原理和方法 掌握细菌涂片的制备 掌握无菌操作技术 二、实验原理 单染色法：只能观察微生物的大小、形状、和细胞排列状况，但不能鉴别微生物以及它的特殊构造等。 复染色法：用两种或两种以上染色液进行染色，有协助鉴别微生物的作用，故也称鉴别染色法。常用的有： 革兰氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、鞭毛染色法等。 革兰氏染色 丹麦C.Gram创立，用于细菌分类学研究 细菌细胞壁的结构 涂片 干燥 固定 染色 水洗 干燥 镜检 操作步骤 实验步骤 无菌操作 革兰氏（Gram）染色法 1. 涂片 2. 初染：在做好的涂面上滴加草酸铵结晶紫染液，染1分钟，倾去染液，流水冲洗至无紫色。 3. 媒染：除去残水后，用稀碘液覆盖涂面1分钟，后水洗。 4. 脱色：除去残水后，滴加95%酒精进行脱色约30－60秒，后立即用流水冲洗。 5. 复染：滴加石碳酸复红染色液，染30秒，水洗后用吸水纸吸干。 6. 镜检：观察染色结果并绘图。 Figure 1 - A Gram stain of Gram + Staphylococcus cells. Figure 2 - Gram stain of Gram – E. coli cells 实验报告 1、细菌简单染色、革兰氏染色的原理、方法和步骤。 2、记录所观察到的染色结果，并绘图 思考题 1）制备细菌染色标本时应注意哪些环节？ 2）涂片为何要固定？如果你的涂片未经热固定，将会出现什么问题？ 如果加热温度过高、时间过长，又会怎样？要得到正确的革兰氏染色结果必须注意哪些操作？哪一步是关键？Why? 3）为什么要等制片完全干燥后才能用油镜观察？ *
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