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第二章 光电比色计第一节 比色分析比色分析是基于溶液对光的选择性吸收而建立起来的一种分析方法，又称吸光光度法。有色物质溶液的颜色与其浓度有关。溶液的浓度越大，颜色越深。利用光学比较溶液颜色的深度，可以测定溶液的浓度。根据吸收光的波长范围不同以及所使用的仪器精密程度，可分为光电比色法和分光光度法等。比色分析具有简单、快速、灵敏度高等特点，广泛应用于微量组分的测定。通常测定含量在6-1～6-4mg/l的痕量组分。比色分析如同其他仪器分析一样，也具有相对误差较大（一般为1%～5%）的缺点。但对于微量组分测定来说，由于绝对误差很小，测定结果也是令人满意的。在现代仪器分析中，有60%左右采用或部分采用了这种分析方法。在医学学科中，比色分析也被广泛应用于药物分析、卫生分析、生化分析等方面。一、朗伯-比尔（Lambert-Beer）定律溶液颜色的深浅与浓度之间的数量关系可以用朗伯-比耳定律来描述。当一束平行单色光（只有一种波长的光）照射有色溶液时，光的一部分被吸收，一部分透过溶液（图2-1-1）。设入射光的强度为I0，溶液的浓度为c，液层的厚度为b，透射光强度为I，则图2-1-1光吸收示意图　　=Kcb图2-1-1光吸收示意图式中表示光线透过溶液时被吸收的程度，一般称为吸光度（A）或消光度（E）。因此，上式又可写为：　　A=Kcb上式为朗伯-比尔定律的数学表示式。它表示一束单色光通过溶液时，溶液的吸光度与溶液的浓度和液层厚度的乘积成正比。式中，K为吸光系数，当溶液浓度c和液层厚度b的数值均为1时，A=K，即吸光系数在数值上等于c和b均为1时溶液的吸光度。对于同一物质和一定波长的入射光而言，它是一个常数。比色法中常把称为透光度，用T表示，透光度和吸光度的关系如下：A＝＝＝－lgT当c以mol·L-1为单位时，吸光系数称为摩尔吸光系数，用ε表示，其单位是L·mol-1·cm-1。当c以质量体积浓度（g·ml-1）表示时，吸光系数称为百分吸光系数，用E(%)表示，单位是ml·g-1·cm-1。吸光系数越大，表示溶液对入射光越容易吸收，当c有微小变化时就可使A有较大的改变，故测定的灵敏度较高。一般ε值在103以上即可进行比色分析。如果测定某种物质对不同波长单色光的吸收程度，以波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图可得一条曲线，即物质对光的吸收曲线，可准确地描述物质对光的吸收情况。二、比色分析的测量方法无论是光电比色计还是分光光度计，最常用的测量方法有如下两种。1.　标准曲线法先配制一系列不同浓度的标准溶液，用选定的显色剂显色。选用合适波长的入射光（光电比色计用滤光片，分光光度计可转动波长调节器）。测定时先以空白溶液调节透光率100%，然后分别测定标准系列的吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标作图得到一条通过原点的直线，叫做标准曲线（或称工作曲线）。例如，测定维生素B12时，可预先绘制维生素B12的A-c标准曲线（图2-1-2），再用完全相同的方法和步骤测定被测溶液的吸光度，即可从标准曲线上找出被测溶液的浓度或含量。这种方法叫做标准曲线法。标准曲线可在固定仪器和方法的条件下多次使用，适合于经常性工作。但若仪器不同或测定方法及条件改变，测得的标准曲线不同。因此在更换任何测定条件时都需重新绘制标准曲线。图2-1-2图2-1-2 维生素B12的标准曲线2.　直接比较计算法若仅对个别样品进行测定，且A-c曲线线性良好，可不作标准曲线而直接比较测定结果。先配制一个被测物质溶液浓度相近的标准溶液，与被测溶液在相同条件下测定吸光度。根据下式可以计算。A标=K标c标b标A测=K测c测b测由于使用同一波长的入射光，采用同样的比色皿，测定同样的物质。所以K标=K测b标=b测因此A标/A测=c标/c测则　c测=（A测/A标）× c标　　现代光电比色计，大都加有对数运算电路。使用时只要选用一种标准溶液进行标定，然后便可以用仪器的显示装置直接读取溶液的浓度值，使工作效率大大提高。第二节 光电比色计的基本结构利用光电池或光电管等光电转换元件作检测器，来测量通过有色溶液后透射光的强度，从而求出被测物质含量的方法叫做光电比色法。基于此而设计的仪器叫做光电比色计。一般的光电比色计由光源、滤光片、比色皿、光电检测器、放大和显示等六部分组成。原理方框图如图2-2-1所示。光源滤光片光源滤光片比色皿光电检测器放大显示图2-2-1　光电比色计的结构图图2-2-1　光电比色计的结构图光源发出的复合光经滤光片滤波后，变为近似的单色光。此单色光通过比色皿时，被里面的样品吸收掉一部分，然后照射在光电检测器上。光电检测器将光信号的强弱转变为电信号的大小，最后经放大，由显示部分显示出测量结果。下面，我们对每一部分做一个详细说明。一、光源比色分析所用的理想光源应在整个所需要的波长范围内具有均匀的发光强度。也