产表面活性剂菌的筛选.ppt

产表面活性剂菌的筛选  什么是表面活性剂？ 表面活性剂：是指加入少量能使其溶液体系的界面状态发生明显变化的物质 。 一种生物表面活性剂： 生物表面活性剂 ：是微生物在一定条件下培养时，在其代谢过程中分泌出的具有一定表面活性的代谢产物，如糖脂?多糖脂?脂肽或中性类脂衍生物等。除具有降低表面张力、稳定乳化液和增加泡沫等相同作用外，还具有一般化学合成表面活性剂所不具备的无毒、能生物降解等优点。 生物表面活性剂的优势在哪里？ 空间结构十分复杂和庞大，表面活性高，乳化能力强，多数生物表面活性剂可将表面张力降低到30?mN/m； 具有良好的热稳定性和化学稳定性； 无毒或低毒，能被生物完全降解，不会对环境造成污染和破坏 ； 生 物相容性好，一般不会导致过敏，可应用于药品、化妆品，甚至作为功能性食品添加剂； 分子结构多样，具有特殊的官能团，专一性强 ； 生产工艺简便，常温、常压下即可发生反应，生成设备要求不高； 生产原料来源广阔且价廉，可以从工业废料和农副产品中获得。 生物表面活性剂的几种分类 --以亲水基的不同为分类标准 以糖为亲水基的糖脂类，如鼠李糖脂、槐糖脂和海藻糖脂； 以低缩氨酸为亲水基的含氨基酸类脂，如脂肽、脂蛋白和脂氨基酸； 以磷酸为亲水基的磷脂，如磷脂酰乙醇胺 ； 以 羧酸基为亲水基的脂肪酸，如甘油脂、脂肪酸、脂肪醇和蜡； 结合多糖、蛋白 质及脂的聚合物，如脂多糖复合物和脂杂多糖。 产生物表面活性剂菌的筛选 产表面活性剂菌多以石油为原料。因此，在含石油废水中寻找目的菌。在中性pH及常温下进行产表面活性剂菌的初步筛选。之后，通过进行驯化试验，得到性能较高、较稳定的菌. 具体实验步骤及实验材料： 1.实验材料 以油田磕头机旁油污土壤作为菌种分离土壤，取样后密封备实验使用。 2.培养基 （1）分离筛选培养基 无机盐培养基（g/l): K2HPO4.-3H2O 1.0 , KH2PO4 1.0 , MGSO4-7H2O 0.5, NH4NO3 1.0, CACL2 0.2 ,FECL3 少量，pH 7.5. 富集培养基 （g/l): 无机盐培养基 ，原油 2 pH7~ 7.5. 油平板（g/l) :无机盐培养基，原油2 琼脂20. （2）种子培养基 （g/l):葡萄糖20，蛋白胨5，酵母提取物3，NaCl5 pH 7.5. （3）降解液体培养基（g/l）：无机盐培养基，原油1. 2.实验步骤 （1）对石油降解菌进行富集与分离。取10g污染土壤加入100ml选择培养基中，30℃，150r/min摇床振荡培养5天，吸取5ml上述选择培养基加入新鲜的富集培养基，连续转接5次。 （2）取选择培养液采用稀释平板法进行分离。将培养液稀释后，取0.1ml培养液涂布于油平板上，分离得到能够以原油为唯一碳源生长的微生物单菌落，挑取到LB斜面进行保存。 （3）石油降解菌产表面活性剂性能测定及菌株鉴定。采用排油测定法；将菌落接种于葡萄糖培养基 于 30℃，150r/min振荡培养24h。离心（1000r/min,30min)去菌体，取直径约9cm培养皿，加入50mL左右蒸馏水，水面加入100uL石蜡形成油膜。在油膜中心滴入10uL发酵液。油膜被挤向周围形成排油圈，测定排油圈直径。对筛选出的菌株依据（一般细菌常用鉴定方法）进行形态学观察和生理生化测试。 （4）测定石油降解速率。石油降解菌加入种子培养基，培养24h。分别吸取5mL菌夜接入50mL降解液体培养基，于适当条件下培养7天，测定石油含量，以不接菌的降解液体培养基为对照，重复三次实验。降解率=（CK含油率—接菌含油率）/CK含油率 ×100%. (5)表面活性剂定性和定量测定,得到与之对应菌的产表面活性剂能力,对产能较高的菌进行纯化培养,并保存菌种. 3 注意事项 相同微生物在不同pH、温度等条件下产表面活性剂性能有差异，但是在中性及35℃左右具有最佳性能。 稀释平板法培养时，稀释倍数要适当，过大及过小均不利于高效分离菌种。 产生物表面活性剂菌不仅仅以石油为原料，还可利用植物油脂等为原料。 谢谢观赏! 2015.03