血清的制备(精选).docVIP

血清的制备： 血样收集在试验期，每隔35d采1次血，颈静脉采血10mL，待凝血后，5 000r／min 7rain，分离血清后分装，一20~C冰箱中保存 杨镒峰 魏海军 测试方法将5 l血清样本滴加至加样，此时迅速将试纸条插入反射式分光光度计测试槽内，同时仪器自动开始计时，反应环境温度为37±0．2℃ ，测试时间为100 S。 定标方法：收集正常体检者血清，制得混合血清，分成6等份，其中一份使用7 g／dl BSA稀释一倍，往其中4份添加不同量的尿素标准品。制备含不同浓度尿素的血清样本。6份样本使用脲酶一谷氨酸脱氢酶速率法 科华尿素氮液体试剂盒，日立7020生化分析仪 定值，每份样本重复测定两次。依此定值血清作为临时校准品校准自建尿素测试方法。使用自建方法测试临时校准品，每份样本重复测定3次，记录100 S处反射吸光度值，拟合标准曲线。将确定的标准曲线输入仪器，每批试纸条只需定标一次，以后测试无需再定标。 宁绍华 ，朱世成，王 缦快速定量检测血清尿素含量干化学方法的建立,现代检验医学杂志2010.1.49 B目前主要测定方法有尿素酶速率法、尿素酶电极法 、二乙酰一肟法和流动注射分析法等，其中二乙酰一肟法应用最为广泛，但具有线性范围窄、反应~,-tl可长、易褪色和影响因素多等的缺点。为了克服这些不足，建立了一种快捷、方便的尿素检测方法一对对二甲基氨基苯甲醛显色法，其原理是对二甲基氨基苯甲醛可以与尿素反应生成带柠檬黄绿色的物质，颜色的与一定浓度范围的尿素呈线性相关。此外，该反应的最佳反应温度25℃ ，显色时间5 min就达到稳定，即可进行比色测定。通过对两种不同方法的测定结果比较，探讨对二甲基氨基苯甲醛显色法代替二乙酰一肟法，作为尿素含量测定方法的可行性。 1 材料与方法 1．1 仪器和试剂722型分光光度计。100 mmol／L尿素标准液；179．9 mmol／L二乙酰一肟溶液；显色剂：二甲基氨基苯甲醛0．2 g，溶于9 rnl无水乙醇后，加入1 ml浓盐酸。酸性试剂：离子水约100 ml，然后加入浓硫酸44 ml、85％磷酸66 ml。冷至室温后，加入氨基硫脲50 mg及硫酸镉2 g，溶解后稀释至1L 1．2 方法 二乙酰一肟法取尿素标准液在0—25 mmol／L范围内，从高到底稀释为5个浓度后，分别取0．01ml加入各试管中后，加入5|nJ酸性试剂和0．5 rnl二乙酰一肟溶液，混匀，置沸水浴加热12 min，取出置冷水中冷却5 min，以超纯水调零，测定A540吸收测定值，做出标准曲线，计算样品的尿素浓度。对二甲基氨基苯甲醛显色法 取尿素标准液在0～70 mmol／L范围内，从高到底稀释为稀释为7个浓度，分别取0．5 ml加入各试管中后．加人5．25 rnl超纯水和0．5 m1显色液。以超纯水调零，测定A4如吸收值，做出标准曲线，计算样品的尿素浓度。 曹 昭，万敏，孙陆果 ，胡小平 ，于永利 ，王丽颖 ，张培因, 两种尿素浓度测定方法的比较,中国实验诊断学2010.1.135 尿酸的测定方法 尿酸分子式为c5H14N4o3，MW 168．11，不溶于水，也难溶于酸。尿酸是一种含有嘌呤结构的化合物，也是嘌呤的最重要衍生物。它是一种白色结晶性物质，极难溶于水，也难溶于醚和乙醇，具有弱碱性，可以与强酸成盐。尿酸在生物体内以盐的形式存在，因而溶解度较高。尿酸在尿酸酶的作用下，可以被氧化成尿素囊，其反应式如下： 通过检测该反应过程中尿酸在292nm处吸光度的降低 尿酸酶在293rma处不产生光吸收 ，目前建立了许多尿酸的检测方法。如酶法、尿酸生物传感器检测法等。 1 酶法 如果从动力学角度对目前所使用的酶试剂加以分类，可分为单酶法和酶偶联法。目前临床上常用检测尿酸的方法是单酶法，其基本原理是通过单一的酶促反应后利用各种方法直接测定底物或产物的浓度来求得待测物含量。酶学方法测定尿酸，其反应式如下： 反应在磷酸盐缓冲体系中进行，将试剂混匀，20～25℃孵育30分钟或3TC恒温孵育l0分钟，以试剂空白作对照在60分钟内读取吸光度值，要注意的操作参数是：温度：25℃、30℃ 、或37℃ ，波长：520nm，比色杯光径：lcm，用试剂空白调零点。 计算：尿酸浓度 △A标本／AA标准 x标准品浓度 换算：Uric acid[mg／d1]59．48 Uric acid[umol／L] 随着研究的进展，发现此法虽然操作简便，样品处理简单，但操作过程太复杂。在此基础上人们提出了一种利用固相酶技术制作的一种尿酸传感器检测方法，并且此方法逐渐被尿酸传感器检测方法取代。 2 尿酸传感器检测法 目前，最常用的尿酸检测方法是尿酸氧化酶的尿酸传感器检测法。尿酸传感器_l J采用流动注射分析系统，由样品混合器，恒流泵，覆盖酶膜的氧化极、流动池、热交换器、循环恒温