酵母双杂交系统学案.ppt

（二） 转化效率偏低 酵母转化效率较细菌低4个数量级，转化成为双杂交技术的瓶颈。 办法：引进酵母接合型 a接合型和?接合型（两者之间可，但自身不能形成二倍体） （三）阴性干扰 融合蛋白的表达对细胞有毒性，该怎么办？ 应选择敏感性较低的菌株或拷贝数低的载体 蛋白间的相互作用较弱，应选择高敏感的菌株或多拷贝载体。 蛋白在酵母中不能稳定地表达，或者不能正确地折叠，或杂交蛋白不能转入胞核。 (一) 酵母单杂交系统(one-hybrid system) 酵母单杂交系统原理 酵母单杂交系统原理 酵母单杂交系统应用 (二) 反向酵母双杂交系统（ reverse yeast two-hybrid system ） (二) 反向酵母双杂交系统（ reverse yeast two-hybrid system ） 反向酵母双杂交系统的应用 (二)反向酵母双杂交系统（ reverse yeast two-hybrid system ） 1.2.2 用诱饵质粒pGBKT7-HCK2α′筛选文库 (1) 酵母AH109(pGBKT7-HCK2 α′）感受态制备(醋酸锂法） (2) 文库转化（分步转化法) (3) 检测文库转化效率 (4) 初步筛选阳性候选克隆 转化混合物接种在75块SD/