牛奶DNA提取说明书.docVIP

牛奶中细菌DNA提取试剂盒 Norgen生产的牛奶细菌DNA提取试剂盒的设计是为快速提取从牛奶中发现的多种细菌DNA基因组而准备的。这个试剂盒可供从牛奶样品中发现的革兰氏阴性和革兰氏阳性菌的DNA基因组。DNA基因组是优先于其他蛋白细胞质中纯化得到的。DNA基因组的标准产量依牛奶样品中细菌的密度和种类不同而不同。纯化的DNA基因组可以被已检测到的限制酶完全消解，并且完全兼容PCR，可以用PCR定量和Southern印迹法分析。 Norgen的提纯技术 纯化是使用Norgen所设计的树脂作为分离基质用旋转柱层层析法进行的。Norgen树脂在高盐浓度下结合DNA，在低盐和弱碱条件下释放已结合的DNA。在牛奶样品中发现的细菌的DNA基因组的提纯过程中的第一步离心牛奶样品以凝集可能存在的细菌。如果DNA是从革兰氏阳性菌或未知菌株中提取，那么凝集团块悬浮在酶切缓冲液中以供分解细菌细胞壁。下一步涉及到的溶解细菌细胞是与提供的裂解缓冲液和蛋白酶K结合，这适合各种细菌。在孵育45分钟后，将结合液和酒精加到裂解物中，并将溶液卡到核酸纯化柱上。Norgen树脂结合DNA的方式取决于离子浓度,因此,DNA将结合到纯化柱上,而大部分的RNA和消化蛋白质会倒掉或留在树脂上部。结合DNA再用提供的清洗缓冲液清洗两遍以除去所有残留杂质，用洗脱缓冲液洗脱纯化的细菌DNA基因组。 说明书 试剂盒说明书 最大牛奶量 1ml 10个样本的纯化时间 1小时 可处理细菌种类 革兰阴性菌和格兰阳性菌 最小可捡限量 每毫升牛奶10个细菌 优点 用快速核酸纯化柱快速又简便 可提纯牛奶中发现的格兰阳性菌和革兰阴性菌中的DNA基因组 可检测到并提纯牛奶样本中的极低浓度细菌（每毫升10个细菌） 提纯高质量DNA基因组 试剂盒组分 组成 每25个样 酶切缓冲液 3ml 裂解液 12ml 结合液 4ml 洗液1 15ml 洗液2 5ml 洗脱缓冲液 8ml 蛋白K（冻干） 6mg 溶菌素（粉） 60mg 小型核酸纯化柱 25 收集管 25 1.7ml的洗脱管 25 产品说明书 1 储存条件和产品的稳定性 所有液体严密密封，在室温下保存。溶菌素在到达前保存在零下20摄氏度，酶切缓冲液在添加溶菌素前保存在零下20摄氏度。冻干的蛋白K在到达前和复原后应该保存零下20摄氏度。这些试剂在未开封前可保质至少1年。 预防措施和免责声明 这个试剂盒是专门为科研设计的，并不为人类和诊断使用。 使用试剂时确保穿着合适的实验服、戴一次性手套、护目镜。有关更多信息，请参考合适的材料安全数据表（MSDSs)。这些可以在中看PDF文件。 结合缓冲液和清洗液1中含有胍盐，使用时要小心。胍盐再与漂洗剂结合时形成高活性化合物，因此必须妥善处理这些试剂。 提供试剂和设备 ·微型离心管 ·台式微量离心机 ·微量移液枪 ·550C孵化箱 ·370C孵化箱（只为革兰阳性菌） ·溶葡球菌酶（只可选革兰阴性菌） ·96-100%的酒精 ·棉签 使用之前的准备 1.会用到一台可用最大量程的变速离心机。如果没有可变速离心机，可以用一台固定转速的离心机，不过可见产量下降。 2.预热孵育箱或加热器到550C（未知或格兰阳性菌热到370C） 3.给提供的清洗液II离心管中加入15ml96-100%的乙醇。这部完了将是20ml。瓶子上的标志以供检查是否加了乙醇。 4.将蛋白酶K溶于300μL分子水平级别的水，等分成小分，在零下20摄氏度下保存这种没用过的蛋白知道使用时。 5.将提供的酶切缓冲液加到含有溶菌酶的离心管中，混合均匀。等分成小分，在零下20摄氏度下保存这种没用过的蛋白直到使用时。 6.已知革兰氏阳性菌抗溶菌素，比如葡萄球菌，就该补充含溶葡球菌素的酶切缓冲液（不提供）。每管液体中，加5微升溶葡球菌素液到100微升的酶切缓冲液中（含溶菌素）。 7.如果只提革兰氏阴性菌，请用1A步骤；未知或革兰阳性菌，请用1B步骤。 1A 将最多1ml的牛奶加到微型离心管中。 注：最多1毫升的牛奶是推荐给正常的牛奶样品或亚临床乳腺炎样本。临床乳腺炎样本,尤其是那些高白细胞的样本,建议最多200μL牛奶样品。如果样品非常粘，非常难吸,用18ml规格的注射器细几次即可降低其粘度。 2.14000g离心3分钟 快速倒立管倒掉上清，并在废液池壁轻轻磕几下以确保磕掉离心后牛奶样品上层飘的奶油。用干净的200微升的枪尖或棉签清除掉残留在微量离心管壁上的白色物质。确保白色