酸性粘多糖.pptVIP

糖 的 组 织 化 学 糖的分类 单糖和双糖 多糖：淀粉、纤维素、糖原 粘液物质 - 粘多糖 中性 酸性 - 粘蛋白 糖蛋白 糖脂 糖 原 一. 糖原的概念 由多糖衍化而来，是天然存在于动物组织内的多糖 分布：胞浆内 肝、心肌、骨骼肌 同种葡萄糖的聚合物 作为糖原染色的切片，必须冰冻或经特殊固定液固定后进行切片 二.固定剂的选用 Carnoy（冷4℃） 无水乙醇 60ml 防止糖原溶于水 氯 仿 30ml 增加渗透力 冰 醋 酸 10ml 抵消乙醇对组织的 收缩、硬脆作用 *优点：固定迅速，保存肝糖原 *缺点：破坏红细胞，只适合小块组织 2. Gendre （冷4℃） 苦味酸无水乙醇饱和液 80ml 甲醛 15ml 冰醋酸 5ml 临用前混合配制 3. Lillie固定液（AAF） 无水乙醇 85ml 冰醋酸 5ml 甲醛 10ml 固定液预冷4℃，固定24h后，95%乙醇脱水，包埋 三.固定中注意事项 1.尽可能取小块新鲜组织及时固定，不用水溶性固定液 2.应用含酒精的溶液作为固定液，但最好不单独使用乙醇固定，以乙醇为溶剂的混合固定液固定为佳 3.固定原理：使糖原与固定液之间相结合的蛋白质凝固，糖原被周围凝固的蛋白质膜保护起来，而不但使糖原凝固 四.显示糖原的方法 1. 碘染色 2. 胭脂红染色 *3. 过碘酸-Schiff 反应 4. 银浸染法 过碘酸-Schiff 反应 Peredic Acid Schiff, PAS (一）染色原理 过碘酸是一种强氧化剂，能氧化糖分子，使相邻二个碳原子上的羟基（-OH）变为醛基（-COOH） Schiff氏试剂是付品红（碱性品红）经SO2作用后，形成的无色溶液 当Schiff氏试剂与醛基作用后，形成含有发色基团的化合物，呈现紫红色沉淀 *基本原理 1. 通过过碘酸的氧化作用，将糖分子中的碳键打断，游离出醛基 2. 醛基与Schiff试剂反应显出红色沉淀 (二) 染色步骤 1.石蜡切片脱蜡至水 2.1%过碘酸溶液内氧化5-10min 3.流水洗5min, 再用蒸馏水洗 4.用Schiff试剂处理10-20min 5.流水洗10min 6.复染(可用Mayer明矾苏木素或甲基绿衬染细胞核) 7.脱水、透明、封片 【结果】 胞浆内PAS阳性物质呈紫红色，颗粒状或均质团块状，胞核呈蓝色或绿色 红色深浅反应含糖原量的多少 【对照】 采用淀粉酶或唾液酶消化切片 对照片PAS（-），未处理片（+） （三）PAS反应的应用 证明与鉴别细胞内空泡样变性 （水变性、脂肪变性、糖原） 心肌病变及其它心血管疾病的诊断和研究 糖原累积病的诊断及研究 糖尿病的诊断及研究 某些肿瘤的诊断与鉴别 PAS（+） PAS（-） 肝细胞癌 胆管癌 横纹肌瘤 颗粒细胞肌母细胞瘤 Ewing肉瘤 骨的网织细胞肉瘤 （四）注意事项 1.过碘酸溶液与Schiff试剂均可反复使用多次，用后密封放入冰箱4℃保存 2.新鲜配成的溶液与应用过的作用时间不同，刚配成的作用时间短，以后逐渐延长 3.过碘酸溶液在作用前应与室温接近，温度太低，造成氧化不全，影响效果 4. Schiff试剂如呈淡红色，则应弃去重配 5. Schiff试剂配法很多，区别不大，可以随意选用 6. Schiff试剂作用时，染色缸必须加盖，不然Schiff试剂将因SO2消失而失效 Schiff试剂 碱性复红 1g 1N盐酸 20ml 偏重亚硫酸钠 1g 重蒸馏水 200ml 粘 液 物 质 人体的各种腺体及其他许多组织、细胞，如结缔组织、纤维母细胞、软骨基质等都能合成和分泌粘液物质，统称为粘液 分类 中性粘多糖 酸性粘多糖 1.硫酸化粘液物质 结缔组织 （强）