玉米黄质在番茄中组成的积累缓解盐胁迫诱导的光抑制和光氧化分析.pptx

玉米黄质在番茄中组成的积累缓解盐胁迫诱导的光抑制和光氧化 Physiologia Plantarum 2012 影响因子：3.656 主要内容 1.背景意义 2.材料方法 3.结果 4.讨论 1.背景意义 盐胁迫是降低植物生长和生产力的最重要的环境因子之一。许多遭受盐胁迫的植物中的生长下降通常与光合能力的下降相关。盐胁迫诱导的光合作用降低增加了过剩激发能的数量。如果过剩光能不能适当的耗散，甚至适度光照下光合机构也可能被损伤，因此二次胁迫如ROS损伤，经常发生。 D1蛋白，是光系统II（PSII）反应中心复合物的其中一种蛋白质，可快速周转，并用以反映PSII光抑制的程度。D1蛋白的从头合成被细胞内ROS含量的升高显著抑制。此外，有研究表明，单线态氧能直接引起PSII的氧化损伤。事实上，许多研究表明盐胁迫显著增强了螺旋藻，大麦叶片，高粱，土豆和黑麦的PSII的光抑制和光损伤。 为了应对激发能的吸收和使用间的不平衡，植物和其他光合生物调节光合作用捕光并利用一系列抗氧化酶和抗氧化分子清除活性氧和自由基。类胡萝卜素玉米黄质（Z），由紫黄素（V）通过中间体花药黄素（A）在叶黄素循环中去环氧基形成，参加了所有这些保护功能。叶黄素循环是由紫黄质脱环氧酶（VDE：EC1.10.99.3）和玉米黄质环氧化酶(ZE: EC1.14.13.90)催化。过度光照条件下，VDE通过A催化V转化到Z；当光胁迫不再存在时ZE催化反应逆向进行。 ZE是位于叶绿体类囊体膜基质一侧的脂质运载蛋白家族的成员。然而，通过Z保护类囊体膜组分免受光抑制和光损伤的机制尚不清楚。Z在PSII天线中过量激发能的耗散起作用，作为热量通过非光化学淬灭（NPQ）过程耗散。Z似乎在通过NPQ独立的过程建立光氧化应激耐受性中有一个非常重要的作用，能够保护类囊体膜的脂质免受氧化损伤。此外，Z也具有减小捕光叶绿素天线大小和降低膜的流动性来降低类囊体内部ROS的渗透率。 Z在植物应对过度光照胁迫中起重要作用。以往的报道主要集中在模型植物中Z在强光胁迫或低光强时的低温胁迫，通过Z参与NPQ。然而，高等植物中Z应对盐胁迫诱导的光抑制仍不清楚。例如，Z的积累是否可以环境盐胁迫诱导的光抑制和脂质过氧化，是否可以在盐胁迫条件下减少细胞内活性氧的水平和降低D1含量？这可能是部分因为植物应对盐胁迫的一个典型反应是光合的降低。结果是盐胁迫叶片中光能的吸收超过推动CO2固定。甚至在适度光照下如果能量不能适度耗散时光合机构可能被摧毁。在自然条件下，盐胁迫往往和光胁迫联合发生。因此，Z应对盐胁迫诱导的光抑制和光氧化的作用值得探究。 检测转基因番茄植株中的LeZE蛋白（番茄的玉米黄质环氧化酶）含量和mRNA，在冷胁迫之前和之后的反义转基因植株中检测到较高的Z含量，Z含量的积累增强了植物对弱光下冷胁迫的耐受性。为了解番茄中Z积累对盐诱导的光抑制和光氧化的生理作用和作用机制，LeZE转基因植物的反义抑制和野生型WT番茄被用于试验。 2.材料方法 植物材料和处理方法 色素分析：RPHPLC（反相高效液相色谱法） 盐胁迫条件下WT和转基因植物的生长功能：株高、鲜重、干重 叶绿素荧光和净光合速率（Pn）测定 过氧化氢和超氧阴离子自由基的组化检测 定量测定过氧化氢的浓度和脂质过氧化：测定丙二醛（MDA） 相对电子电导测量(REC) D1蛋白的检测：SDS、western blotting 3.结果 3.1转基因番茄植株较高的Z含量 转基因番茄植株的总V + A + Z没有显著变化(Table 1)，但是反义转基因植株的Z/(V+ A + Z)比率显著高于野生型植株，在盐胁迫之前和之后(Fig. 1A, Table 1)。盐胁迫后，野生植株中的Z含量显著增加，但仍明显低于反义转基因植物(Fig. 1A, Table 1). 在野生型植物，叶黄素循环色素的去环氧化率（Z +0.5A）/（V + A + Z）在5天盐胁迫之后显著上升。然而，反义转基因植物中(Z +0.5A)/(V + A + Z)率仍显著高于WT (Fig. 1B)。这些结果表明，LeZE的抑制引起了盐胁迫之前和之后的番茄中Z的积累。 3.2转基因植物的能量耗散能力无显著变化 PSII的过剩能量耗散能力通过NPQ检测。在WT和三个反义转基因品系中，当暴露在盐胁迫条件下时，NPQ显著上升，但是WT和转基因组无显著差异(Fig. 1C)。 3.3盐胁迫下的生长分析 在正常生长条件下所有植物生长良好，但生长在盐胁迫下植物受到抑制。与WT相比，转基因植物在盐胁迫条件下生长更好(Fig. 2)。为了获得进一步的证据表明反义转基因植株的盐胁迫耐受性提升，测量WT和转基因组的株高，鲜重和干重。在正常生长条件下，转基因株系表现出与WT组几乎同相同的株高，鲜重和干重。然而在盐胁