病理制片和染色技术.ppt

二、 网状纤维染色㈠网状纤维染色的形态特点和染色原理 网状纤维是网状结缔组织内的一种纤维。它由网状细胞可产生，网状细胞是星状多突的细胞，核大，着色较浅，核仁明显，胞质较丰实，胞突彼此连接形成细胞网架。网状纤维细而有分支，穿行于细胞体和突之间，共同构成网状支架。这种纤维用H·Ｅ染色一般不易辨认。若用银氨溶液浸染能使纤维变成黑色，故又称嗜银纤维。  网状纤维的应用比较广泛，用来判定病变组织支架的破坏情况，组织、脏器网状支架的存在与塌陷、完整与破坏、网状纤维的分布及走行，有多少、粗细、疏密或有无断裂形态变化。 网状纤维染色的原理  网状纤维的染色方法很多，但是染色原理基本相同，有以下方面。（1）氧化 氧化的作用是使网状纤维具有选择性，不经氧化的切片，网状纤维均不能较好地显示出来，常用的氧化剂是高锰酸钾。（2）漂白 一般采用2%草酸，使漂白后无色。 （3）媒染 作媒染时多用2%硫酸铁氨（俗称铁明矾）。这些试剂可增加网状纤维对银氨液的选择性。（4）浸银 也称镀银，且不同的银氨液浸染切片，使银氨配位化合物与网状纤维结合，即带正电荷的二氨合银Ag（NHs）+2被具有嗜银性物质的网状纤维吸附，时间从数称钟到数分钟。（5）还原 甲醛液是还原剂，能把与网状纤维结合的银氨配位化合物网状纤维还原成棕黑色的金属银。 ㈡ 网状纤维染色的应用 ⑴ 用于显示和鉴别肿瘤的性质和来源1）显示和区分癌与肉瘤 来源于上皮组织的恶性肿瘤（癌）仅癌巢周围有网状纤维包绕，巢内癌细胞之间则没有网状纤维分部。来源于间叶组织的恶性肿瘤（肉瘤），瘤细胞之间往往可见较多的网状纤存在。 2）显示和区分血管内皮瘤与血管外皮瘤 恶性血管内皮瘤的瘤细胞主要在嗜银纤维鞘结构以内，单个细胞则嗜银纤维包绕；恶性血管内皮瘤的瘤细胞均位于小血管之间网状纤维鞘之外，并有丰富的网状纤维自小血管壁向外呈放射状包绕癌细胞。 3）用以鉴别淋巴细胞肉瘤与网状细胞肉瘤等 在淋巴细胞肉瘤中产生的网状纤维比在正常淋巴结内的网状纤维鞘为减少，网状纤维在瘤细胞间自由行走；而网状细胞肉瘤的网状细胞中会产生较多的网状纤维，与网状细胞紧密粘连，分布于每个细胞之间。 ⑵ 用于某些肿瘤的诊断 根据染色所显示的网状纤维多少、分布及行走特点，可用于诊断下列肿瘤。 1）平滑肌肉 细胞之间见有大量平行分布的网状纤维。2）纤维肉瘤 可见大量网状纤维存在，并且密集包绕细胞。3）滑膜肉瘤 其梭形细胞也产生网状纤维，但不如纤维肉瘤多。 ⑶ 用于观察和研究癌组织的发生、发展及其恶性程度 癌组织发生，发展过程以及癌组织生长速度，可通过网染进行观察和研究，如癌巢周围的网状纤维包囊完整，说明癌组织生长较慢，恶性程度低；再如子宫颈鳞状细胞癌巢周围网状纤维分解，说明癌组织正在扩散，其恶性程度较高。 ⑷ 显示与观察基底膜的变化 上皮样间叶细胞、间皮或滑膜等，可形成细胞巢也可产生少量网状纤维，压迫周围网状纤维，但为断断续续的绝不连成一线，不形成基底膜。显示与观察基底膜的存在与否，不但能更有效地判断其上皮来源，而且有助于区分不同来源的上皮肿瘤。如甲状腺髓样癌系假滤泡，无基底膜；滤泡癌或正常滤泡有基底膜。 ⑸ 用于坏死组织的结构及类型1） 凝固性坏死 用ＨＥ染色往往为一片红色的无定形物质，识别不出网状纤维支架的形态。用显示网状纤维的特殊染色方法，可观察到早期凝固性坏死处的网状纤维支架还保留其特点。 2） 肺结核干酪样坏死 结核用网状纤维染色后，可以弄清其病变的起源与发展，并可区分结核球的类型，即 肺炎型、肉芽肿型、阻塞空洞型。肺炎型的坏死组织中尚存在肺泡状排列的网状纤维；肉芽肿型为大量杂乱排列的网状纤维；阻塞空洞型的内容物则看不到网状纤维。 ⑹ 用于显示和研究肝组织病变 用网状纤维的染色法，观察肝脏病变处的网状支架形态、分布特点及其破坏情况，可以判定和研究其病变性质、程度及其发展与转规。 ㈢ 网状纤维染色的注意事项（1）用新蒸馏水配制最好用双蒸水配制。（2）所用玻璃器材及载玻片均要达到化学洁净程度，必要时用粘合剂粘连切片，防止脱片现象。（3）对乙配制好的硝酸银液和氨银溶液，要贮存冰箱中保存待用。 （4）在染色过程中，用染氨银染液或硝酸银液的前后应用蒸馏水洗浸。（5）氯化金调色和硫代硫酸钠固定的时间不应太长，否则会引起网状纤维染色变淡。（6）根据诊断需要，可进行胞核染色和其其他套色纤维增染，使色彩更为艳丽、清晰。（7）切片脱水后及时封片，不宜在空气中停留时间过长，以免产生色素颗粒。 ?【 氨银液的配制】 取10%硝酸银水溶液5ml于三角烧瓶内，一滴一滴地