第七章 预处理和固液分离技术.ppt

学习目标 知识要求 掌握去除杂蛋白和金属离子的方法和原理；掌握影响过滤速度的因素及改进过滤性能的方法；掌握常用细胞破碎的方法，各种方法的优缺点和适用范围。 了解预处理的目的和方法，了解发酵液过滤特性。 能力要求 熟练掌握去除发酵液中杂蛋白和金属离子的操作技能。 学会包涵体的破碎技术。 第一节 发酵液过滤特性的改变，发酵液预处理和固-液分离 生物分离过程的一般流程 预处理和固液分离内容 第一节 发酵液过滤特性的改变，发酵液预处理和固-液分离 发酵液成分很复杂，包含菌（细胞）体，胞内外代谢产物，及剩余的培养基残分等。 目标物质浓度通常很低，杂质较多，生物物质一般又极不稳定。 一、发酵液过滤特性的改变 二、发酵液的预处理 目的： ① 改变发酵液的物理性质，促进从悬浮液中分离固形物的速度，提高固液分离效率； ② 分离菌体和其它悬浮颗粒，除去部分可溶性杂质和改变滤液的性质，以利于提取和精制后继各工序的顺利进行。 二、发酵液的预处理 （一）改变发酵液的过滤特性 二、发酵液的预处理 （一）改变发酵液的过滤特性 加热 1）加热降低液体粘度 2）加热使蛋白质变性凝固 变性蛋白质的溶解度小。如柠檬酸发酵液加热至80℃以上，可使蛋白质变性凝固，过滤速度加快。 只适用于对热较稳定的液体。注意加热温度与时间，不影响产物活性和细胞的完整性。 （一）改变发酵液的过滤特性 （一）改变发酵液的过滤特性 凝聚：胶体粒子在中性盐促进下脱稳相互聚集成大粒子（1mm） 机理：1）中和粒子表面电荷 2）消除双电层结构 3）破坏水化膜 胶体双电层结构 发酵液中菌体表面带有负电荷，由于静电引力使溶液中反离子被吸附在其周围，在界面上形成了双电层。 正离子同时受到使它们均匀分布的热运动影响，具有离开胶粒表面的趋势。 胶体双电层结构 （一）改变发酵液的过滤特性 常用的凝聚剂电解质有： 絮凝：大分子聚电解质将胶体粒子交联成网状，形成絮凝团的过程机理：架桥作用 采用絮凝法可形成粗大的絮凝体，使发酵液较易分离。 高分子絮凝剂的吸附架桥作用 絮凝的影响因素 发酵液的性质（细胞浓度，表面电荷）； 絮凝剂的浓度，最佳用量为粒子表面积约有一 半被聚合物覆盖； 絮凝剂的分子量； pH 控制； 搅拌速度。 （一）改变发酵液的过滤特性 常用的凝聚剂电解质有： 4.加入助滤剂（filter aids） 一种不可压缩的多孔微粒， 在发酵液中加入固体助滤剂，则菌体可吸附于助滤剂微粒上，助滤剂就作为胶体粒子的载体，均匀地分布于滤饼层中，降低了滤饼的可压缩性，减小了过滤阻力。 常用的助滤剂是硅藻土，其次是珍珠岩粉、活性炭、石英砂、石棉粉、纤维素、白土等。 杂蛋白去除-沉淀法 precipitation 杂蛋白去除- 吸附法 adsorption 加入某些吸附剂或沉淀剂吸附杂蛋白质而除去。 四环类抗生素生产中，采用黄血盐和硫酸锌的协同作用生成亚铁氰化锌钾K2Zn3[Fe(CN)5]2的胶状沉淀来吸附蛋白质，利用此法除蛋白质已取得很好的效果。 在枯草杆菌发酵液中，常加入氯化钙和磷酸氢二钠，这两者本身生成庞大的凝胶，把蛋白质、菌体及其它不溶性粒子吸附并包裹在其中而除去，从而加快了过滤速度。 三、固-液分离 （一）离心分离 离心分离是利用转鼓高速转动所产生的离心力，使悬浮液、乳浊液分离或浓缩的分离的过程。它具有分离速率快、分离效率高、液相澄清度好等优点。但离心设备投资大、能耗高，连续排料时，固相干度不如过滤设备。 （二）过滤 过滤是指借助于一种能将固体物截留而让流体通过的多孔介质，将固体物与液体分离的单元操作。过滤技术可除去发酵液中的固体杂质（如细菌菌丝）达到固液分离，为进一步分离纯化操作提供较澄清的溶液。 （三）固液分离的其它方法 双水相萃取、吸附法、膜处理、絮凝等均可达到固液分离的目的。以上方法各有特点，通常是几种方法综合使用，以提高发酵液预处理效率。 生物分离过程的一般流程 第二节 细胞破碎技术 一、细胞破碎方法分类 (一)　机械法 机械破碎法又可分为 1.组织匀浆器 2.研磨 3.高速组织捣碎机 4.高压匀浆器 5.高速珠磨机 6.超声波震荡法 1.组织匀浆器 组织匀浆器由一内壁磨砂的玻璃管和一根一端为球状（表面磨砂）的杆组成。 匀浆器的内杆球体与管壁之间只有十分之毫米，组织破碎程度高，机械切力对生物大分子破坏较少。制造匀浆器的材料除玻璃外，也可用不锈钢、硬质塑料等。大多数情况下，用这种方法可切碎较薄的动物组织膜，但不易打碎植物和细菌的细胞。 2. 研磨 用研钵和研杵进行，对细菌及植物材料应用较多，它适用于细胞器的制备，如线粒体、溶酶体、微粒体等。一些难以破碎的细胞或微生物菌体则可加一些研磨剂，如玻璃粉、石英砂