第三章 毛细管电泳分离技术-2015.ppt

（2）温度 温度对电泳有显著的影响。 在一个电泳泳动期间，热量（焦耳热）会产生并且在很多途径上影响着电泳扩散。 温度增加引起带电分子迁移带的扩散增加，如果电泳持续时间长（数小时）扩散作用变得更显著。 温度引起蒸发作用 温度引起对流现象 为一次电泳泳动选择一个最佳温度并在整个分析过程中都维持着是必要的。 （3）电泳缓冲液的pH值 pH对一个蛋白质分子上的净电荷有明显的作用。 为了优化（蛋白质）分子混合物的分离，pH值的选择应以净分子电荷为基础。 例如，在一个电泳泳动期间，两个或更多的蛋白质一起迁移而只形成一条区带。如果我们在不同的pH值下进行分析，将导致多余蛋白质带的出现，促使样品中其它蛋白质的分离。 （4）操作电压 一个分子的迁移速率和媒介两边的场强是成比例的。 但是，随着电压的增大对流也上升，导致更强大功率的产生（功率以对流平方的方式增加），这样一些功率以热量形式消散。 电压（或对流）应该要足够大以允许带电分子的快速迁移，但也不能太大以产生过量的热。 （5）载体介质 选择最合适的载体介质以下面几点为依据： 样品质量 分子的大小 如果不得不使用筛分凝胶时，它的毛孔大小（集中性）也应该要选择以适合所研究的分子大小、分析所需时间。 二、毛细管电泳的分离模式 毛细管区带电泳(CZE) 胶束电动毛细管电泳(MECC) 毛细管凝胶电泳(CGE) 毛细管等电聚焦(CIEF) 毛细管等速电泳(CITP) 毛细管离子电泳(CIE) 毛细管电色谱 毛细管阵列电泳 亲和毛细管电泳 第三节　毛细管电泳装置 直流高压电源、毛细管、进样装置、检测器和记录仪等 高压电源可对毛细管施加5~50 kV电压，操作电压一般控制在5~30 kV范围。 CE通常使用内径10~100 μm、长12~120 cm (内涂聚酰亚胺) 弹性融凝石英毛细管，毛细管的两端分别浸泡在含有缓冲溶液的贮液槽中，毛细管内也充满同样的缓冲溶液。 被分离试样可以采用重力法、抽真空法或电迁移法等多种进样方式由毛细管一端进入。 一、毛细管电泳的进样技术 （一）直接在线进样 （二）近端进样及双向进样 （三）流动注射与毛细管电泳联用(FI-CE) （四）液相色谱与毛细管电泳联用 （五）光学门进样 （六）流动门进样 光学门进样装置示意图 流动门进样装置示意图 二、毛细管电泳检测器 由于样品区带在高压电场作用下，迁移速度较快，因此，CE要求所用的检测器必须具有很快的响应速度和很高的灵敏度。 光学检测器 电化学检测器 质谱检测器 核磁共振检测器 检测器类型 检测限/mol·L-1 紫外检测 普通 10-6~10-4 轴向照射 10-8~10-6 二极管阵列或多波长扫描 10-6~10-4 荧光检测 普通灯 10-8~10-5 激光诱导荧光 10-9~10-7 二极管陈列 10-7~10-5 电荷耦合器件 10-12~10-9 质谱检测 10-9~10-5 电化学检测 电导 10-8~10-7 安培 10-9~10-7 激光类检测 激光热透镜 10-8~10-5 激光诱导毛细管振动 10-7 激光拉曼 10-7~10-5 其他 化学发光检测 10-9 折射率检测 10-7~10-5 同位素检测 10-9~10-7 第四节　毛细管电泳技术的应用研究进展 表3-3　毛细管电泳技术的特点 类别 特点 速度 快速，可于几分钟内完成复杂成分的分离 分辨率 带展宽有限，分辨率高 灵敏性 检测下限低，灵敏性高 进样体积 进样体积小，毫微升 检测方式 可使用多种检测器 自动化方面 自动化程度高，进样、分析及数据处理自动化 一、毛细管电泳技术的应用 （一）糖类的分离与分析 （二）在天然中草药分析领域中的应用 （三）在基因工程研究方面的应用 （四）单细胞分析 （五）手性分离 （六）小分子离子分析 二、毛细管电泳技术的发展方向 提高分辨率、速度和检测器的选择性。 增加自动进样装置和使之微机化、商品化。 仪器联用与集成技术。 思考题 1　理解电泳、电渗、电渗流、电泳淌度等几个基本概念。 2　简述影响电泳分辨率的因素有哪些？ 3　简述影响电泳淌度的因素有哪些？ 4　简述常见的毛细管电泳的几种分离模型及各自的特点。 5　简述毛细管电泳装置的主要部件及其发展情况。 6　简述毛细管电泳技术在生化领域的应用进展。 7 电渗流是如何产生的？怎样影响电泳分离过程？ 第三章　毛细管电泳分离技术 第一节　概　述 电泳是基于两种或多种带电粒子或微粒，它们所在的介质受到外加直流电场的作用下，其迁移速率不同而得到分离的一类方法。（electrophoresis ） 发展历程 1807年，Ferdinand Frederic Reuss就观察到了荷电物质在电场力作用下会