实验四溶血素单位的滴定-预防-2008.3.pptVIP

实验四 溶血素的收集和溶血素单位的滴定 Ⅱ 材料 Ⅲ 方法 Ⅳ 结果 实验设计 题目: 经疫苗免疫的个体，如何定量检测相应特异性抗体的产生情况？ 内容： 目的，方法，预期结果，讨论 * 补体结合位点 Fab段 Fc段 C1q 结合位点被屏障 结合抗原之前 CH1 CH2 暴露的C1q结合位点 结合抗原之后 IgM CH3区，IgG CH2区 Ⅰ 原理 Ag + Ab Complement Ag + Ab + C 补体活化 Ⅰ 原理 补体活化 裂解 Ⅰ 原理 SRBC Mouse Anti-SRBC Ab (hemolysin) 免疫 3 times / 3ws IgG + SRBC Complement Hb Hb Hb Serum Ⅰ 原理 SRBC免疫小鼠 2%SRBC 补体(1:30) Test 1 Determination of the titer of hemolysin 1. 收集血清 摘取SRBC免疫小鼠眼球 将血液收集至Ep管中 4 ℃放置30min 12000rpm 离心10min 取上层血清 1 2 3 4 5 系列稀释 1:5, 1:10, 1:20, 1:40, 1:80 血清 N.S 0.4ml 0.25ml 0.25ml 0.25ml 0.25ml 原液0.1ml 0.25ml 0.25ml 0.25ml 0.25ml 稀释比例 1:5 1:10 1:20 1:40 1:80 mix mix mix mix 1 2 3 4 5 6 N.S 系列稀释血清 ① ② ③ ④ Complement 0.2ml 0.2ml 0.2ml 0.2ml 0.2ml 0.2ml 彻底混匀 37℃, 30min 2. 溶血素单位的滴定 0.2ml (Original) 0.2ml (1:5) 0.2ml (1:10) 0.2ml (1:20) 0.2ml (1:40) 0.2ml (1:80) 2%SRBC 0.2ml 0.2ml 0.2ml 0.2ml 0.2ml 0.2ml 0.4ml 0.4ml 0.4ml 0.4ml 0.4ml 0.4ml 3. 观察结果 7 - - - -  0.2ml 0.6ml 0.2ml Test 1 Determination of the titer of hemolysin 完全溶血 不完全溶血 无溶血(对照) 抗体为四肽链的多糖蛋白，由两条相同的重链和两条相同的轻链组成，根据各肽链的结构特点可以分为N端的可变区和C端的恒定区。可变区主要是与抗原表位相结合的区域，而恒定区是同种异型遗传标记存在的部位，并且介导抗体的多种生物学活性，激活补体等。抗体结构通过链内二硫键可将分为多个不同的球形功能域。IgG的CH2和IgM的CH3具有补体结合位点。 抗体在与抗原结合之前，呈T型，补体结合位点被屏蔽；与抗原结合后，补体结合位点暴露，具有激活补体的功能 强调： 1.滴管的使用方法，每组发4支，其中2支为公用，用来取生理盐水和菌液，用完后插入相应试剂管中。 2.一定要混匀，用滴管混匀时，吸时不要用力过猛，以免将液体吸入橡皮头内，吹时不可将液体完全吹净，以免产生过多气泡，影响定量。 3.按顺序加样，不可颠倒 4.伤寒菌液尽量避免洒出。 5.各组记好时间 6.取出时，不可晃动试管，轻拿轻放。 * * * 抗体为四肽链的多糖蛋白，由两条相同的重链和两条相同的轻链组成，根据各肽链的结构特点可以分为N端的可变区和C端的恒定区。可变区主要是与抗原表位相结合的区域，而恒定区是同种异型遗传标记存在的部位，并且介导抗体的多种生物学活性，激活补体等。抗体结构通过链内二硫键可将分为多个不同的球形功能域。IgG的CH2和IgM的CH3具有补体结合位点。 抗体在与抗原结合之前，呈T型，补体结合位点被屏蔽；与抗原结合后，补体结合位点暴露，具有激活补体的功能 强调： 1.滴管的使用方法，每组发4支，其中2支为公用，用来取生理盐水和菌液，用完后插入相应试剂管中。 2.一定要混匀，用滴管混匀时，吸时不要用力过猛，以免将液体吸入橡皮头内，吹时不可将液体完全吹净，以免产生过多气泡，影响定量。 3.按顺序加样，不可颠倒 4.伤寒菌液尽量避免洒出。 5.各组记好时间 6.取出时，不可晃动试管，轻拿轻放。