第七章发酵染菌及防治资料.ppt

第七章 发酵染菌及防治 染菌无法彻底避免；据报道 国外抗生素发酵染菌率为2％~5%，国内抗生素发酵、青霉素发酵的染菌率为2％，链霉素、红霉素和四环素发酵染菌率为5%，谷氨酸噬菌体感染率为1％～2％ 染菌影响产率、质量、三废治理都有很大的影响。 第一节 发酵异常现象及染菌分析 溶解氧水平异常变化显示染菌 三、发酵染菌的原因 发酵染菌率 四、染菌原因的分析 某制药企业链霉素发酵染菌的原因分析 （一）染菌的杂菌种类分析 杂菌是耐热的芽孢杆菌（灭菌、死角） 杂菌是不耐热菌（种子带菌、空气带菌，设备渗漏，管理操作等） 杂菌是真菌（渗漏、灭菌、操作、糖液灭菌不彻底等） （三）不同污染阶段分析 五、染菌隐患的处理 ①严格按照生产工艺要求的各项指标、参数、条件进行操作； ②投产前济宁整个发酵系统的无菌测试； ③严格工人的管理，实行操作记录制度； ④加强在线监测技术手段，各种生物传感器、探头要定期校正； ⑤定期对设备进行检修。 第二节 染菌对发酵的影响 二、不同种类的杂菌对发酵的影响 青霉素发酵：污染细短产气杆菌比粗大杆菌的危害大 链霉素发酵：污染细短杆菌、假单孢杆菌和产气杆菌比粗大杆菌的危害大 四环素发酵：污染双球菌、芽孢杆菌和夹膜杆菌的危害较大 柠檬酸发酵：最怕污染青霉菌 肌苷、肌苷酸发酵：污染芽孢杆菌的危害最大 谷氨酸发酵：最怕污染噬菌体 高温淀粉酶发酵：污染芽孢杆菌和噬菌体的危害较大 三、不同染菌时间对发酵的影响 1，种子培养期染菌 菌体浓度低、培养基营养丰富；易染菌、应灭菌后除去，并对种子罐、管道进行检查和彻底灭菌。 2，发酵前期染菌 杂菌与生产菌争夺营养成分，干扰生产菌的繁殖和产物的形成；易染菌、应特别防止，可重新灭菌，补充营养，重新接种发酵。 3，发酵中期染菌 严重干扰生产菌的繁殖和产物的生成；挽救处理困难，危害性大； 4，发酵后期染菌 如杂菌量不大，可继续发酵。如污染严重，可采取措施提前放罐 四、不同染菌途径对发酵的影响 种子带菌：种子带菌可使发酵染菌具有延续性 空气带菌：空气带菌也使发酵染菌具有延续性，导致染菌范围扩大至所有发酵罐 培养基或设备灭菌不彻底：一般为孤立事件，不具有延续性 设备渗漏：这种途径造成染菌的危害性较大 五、染菌对产物提取和产品质量的影响 1，对过滤的影响 发酵液的粘度加大；菌体大多自溶；由于发酵不彻底，基质的残留浓度加度。造成过滤时间拉长，影响设备的周转使用，破坏生产平衡；大幅度降低过滤收率。 2，对提取的影响 （1）有机溶剂萃取工艺：染菌的发酵液含有更多的水溶性蛋白质，易发生乳化，使水相和溶剂相难以分开 （2）离子交换工艺：杂菌易粘附在离子交换树脂表面或被离子交换树脂吸附，大大降低离子交换树脂的交换量 五、染菌对产物提取和产品质量的影响 3，对产品质量的影响 （1）对内在质量的影响：染菌的发酵液含有较多的蛋白质和其它杂质。对产品的纯度有较大影响。 （2）对产品外观的影响：一些染菌的发酵液经处理过滤后得到澄清的发酵液，放置后会出现混浊，影响产品的外观。 六、染菌程度对发酵的影响 染菌程度越大，即进入发酵罐的杂菌数目越多，对发酵的危害越大。 染少量杂菌，有时可以容忍； 前期和中期染菌，应结合染菌程度综合考虑。 第三节 杂菌污染后的挽救和处理 （1）若碳、氮含量高，终止发酵，灭菌后再接入种子； （2）若造成较大危害，可放掉部分料液，补充新的料液，灭菌后再接种发酵； （3）也可降温、调pH、调整料液比、补加培养基等。 三、发酵中后期染菌的处理 （1）轻微污染，可加入适当杀菌剂或抗生素及正常发酵液，抑制杂菌生长，也可降低温度、通风量、停止搅拌、少量补糖等措施进行处理； （2）若产物代谢到达一定水平，明确染菌可放罐； （3）没有提取价值的发酵液，加热120℃以上，保持30min，排放。 四、染菌后对设备的处理 柠檬酸发酵： 污染细菌：加大通风量，加速产酸，降低pH，抑制细菌生长； 污染酵母 ：加0.025-0.035g/L硫酸铜； 污染黄曲霉；加入另一罐将近成熟的醪液，使pH下降，黄曲霉自溶 污染青霉：青霉能在低pH环境下生长，可考虑提前放罐。 第四节 染菌的预防措施 一、强化空气净化过程 1.空气净化流程 2.过滤介质 过滤芯：活性炭、棉花、超细玻璃纤维纸 膜过滤技术。 3.过滤介质的填装 棉花过滤器最合适的填充密度：160~180kg/m3；玻璃纤维：130~180kg/m3，铺纤维时分层均匀铺设。 4.空气净化管理系统 过滤介质保持干燥，油水分离洁净，选择合理的空气流速和高效的气液分离设备； 3.设备的灭菌 （1）实罐灭菌 实罐时灭菌未充分排除罐内空气：造成假压，升温时，应打开排气等阀门放气。降温时，及时通入空气，根据压力变化进行调