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TPS法提取植物DNA
TPS法提取植物DNA取少量叶片置2ml管子中,加入钢珠;加入400-500ul TPS;粉碎机粉碎,75℃水浴30mins;12000rpm离心10mins;取上清(200ul)至96孔板中,4800rpm离心5mins;取上清(约100ul)至新96孔板中,加等体积异丙醇(用排枪)(先将异丙醇加入96孔板,再加上清,吹打);用保鲜膜包好,放置-20℃ 0.5h以上;12000rpm离心5mins,去上清;加入200ul 75%酒精,静置10mins,离心2mins,去酒精,干燥;加50ul ddH2O,混合均匀,离心。TPS配方 100ml1M (PH8.0) Tris-HCl 10ml0.5M EDTA (PH8.0) 2mlKCl 7.45gddH2O 至100ml真菌DNA抽提方法-----CTAB法从PDA培养基上取菌丝至1.5ml管中,液氮研磨;加入CTAB buffer 300ul, 70℃烘箱放置1h;加入等体积的氯仿充分vortex涡旋震荡混匀;12000rpm,10mins;取上清液(约200ul),加入等体积异丙醇充分混匀,放置-20℃沉淀(时间越长,沉淀越充分,可过夜);12000rpm离心10mins;去上清,用500ul 70%乙醇洗涤,离心1-2mins;去乙醇,干燥加入100ulddH2O+3ul RNase溶解。CTAB配制 1L (室温保存):CTAB(非离子型去污剂十六烷基三甲基溴化铵) 15g1M Tris-HCl(PH8.0) 75ml0.5M EDTA (PH8.0) 30mlNaCl 61.4gadd ddH2O to 1L 注意:配制时须加热50℃水浴溶解。
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