2-DNA的复制、损伤与修复精选.pptxVIP

Replicationanddamagerepair第二章DNA的复制、损伤和修复第一节DNA的复制(Replication,DNAbiosynthesis)指DNA双链在细胞分裂以前进行的复制过程。哺乳动物的细胞周期（一）半保留复制DNA在复制时，以亲代DNA的每一股作模板，合成完全相同的两个双链子代DNA，每个子代DNA中都含有一股亲代DNA链，这种现象称为DNA的半保留复制(semi-conservativereplication)。意义：半保留复制说明DNA在代谢上的稳定性。经过许多代的复制，DNA链仍可保持完整，这在生物的遗传上是十分重要的。一、DNA复制特征DNA以半保留方式进行复制，是在1958年由M.Meselson和F.Stahl所完成的实验所证明。该实验首先将大肠杆菌在含15N的培养基中培养约十五代，使其DNA中的碱基氮均转变为15N。将大肠杆菌移至只含14N的培养基中同步培养一代、二代、三代。分别提取DNA，作CsCl密度梯度离心.半保留复制证据（以原核生物大肠杆菌为例）原料：dNTP，Mg++双链DNA模板引物（primer），常是RNA，有游离的3’OH。引物酶（primase，DnaG），用于合成复制所必需的RNA引物解螺旋酶(helicase),DnaB,由DnaA和DnaC协助在复制的起始点（OriC）上解开双螺旋。与复制有关的酶和因子复制的起始点与方向亲代DNA开链，复制起始点呈叉型移动复制起始点（ori）：DNA复制要从DNA分子的特定部位开始，此部位称复制起始点    原核：一个起始点，约245bp,特殊的重复序列    真核：多个起始点oriE.coli复制起始点oriC跨度为245bp，包括两个关键序列：13bp的序列和9bp序列,它是决定和控制E.coli染色体复制的唯一片段。13bp序列区，每一个顺序都由GATC开始，富含A和T，有助于螺旋解开，控制复制何时开始。9bp重复序列，重复出现4次，能与起始蛋白dnaA特异结合，当dnaA蛋白（约20种）结合于ori的4个部位上时复制开始。dnaA蛋白（一种专一的蛋白）和ori结合后，双螺旋解开形成复制叉。故dnaA蛋白与启动解链有关,dnaA蛋白是起始的关键成分。大肠杆菌复制起点成串排列的重复序列　　　基因组能独立进行复制的功能单位称为复制子(replicon)，每个复制子都含有控制复制起始的起点(origin)，可能还有终止复制的终点(terminus)。每个起始点产生两个移动方向相反的复制叉，复制完成时，复制叉相遇并汇合连接。习惯上把两个相邻起始点之间的距离定为一个复制子。（二）复制子一个复制子只含有一个专一的复制起点和复制结束的终点。一个完整的复制子在一个细胞周期只复制一次(真核)。原核生物染色体和质粒都是独立（只有单一个）复制子；真核细胞染色体中有多个复制子组成。DNA复制时，以复制起始点为中心，向两个方向进行复制.但在低等生物中,也可进行单向复制（如滚环复制）①.原核细胞：染色体和质粒固定起点双向复制，②.真核生物：染色体DNA，复制时多个起始点。（三）复制方向复制方向DNA合成的方向单向、双向？1个起始点复制中的大肠杆菌染色体放射自显影图(Caims实验)将3H-胸苷标记大肠杆菌DNA，经过近两代的时间，3H-胸苷掺入大肠杆菌DNA。用溶菌酶把细胞壁消化掉，使完整的大肠杆菌染色体DNA释放出来，放射自显影，得到上图。非复制部分（C）银粒子密度较低，由一股放射性链和一股非放射性链构成。已复制部分站整个染色体的三分之二，其中一条双链（B）仅有一股链是标记的，另外一股双链（A）的两股链都是标记的，银粒子密度为前二者的两倍。染色体全长约为1100微米。双向复制复制子真核生物两个相邻复制起始点之间的DNA片段以起始点为中心，向两个方向进行复制多个起始点二、DNA复制的酶学1.模板：解开成单链的DNA母链3.DNA聚合酶，DNA-pol2.底物dNTP：dATP，dGTP，dCTP，dTTP4.引物（primer）：RNA引物5.其他酶和蛋白质因子解链相关酶类1.解旋酶(helicase)2.拓扑异构酶（topoisomeraseI、II）3.单链DNA结合蛋白(SSB)DNA解旋酶(helicase)（解链酶）功能：DNA的双螺旋解链（解DNA双链），解开一对碱基，需2分子ATP，作用点：DNA上局部单链处，向双链方向解链。种类：E.coli有四种解螺旋酶，I、II、III和rep蛋白。I、II、III中任一种沿模板5-3方向移动，rep蛋白沿模板3-5方向移动。拓扑异构酶（Topo）DNA正超螺旋与负超螺旋负超螺旋正超螺旋DNA双螺旋拓扑异构酶首先在大肠杆菌中被发现，它可使DNA的一条链发生断裂和再连接，反应无需供给能量