血清葡萄糖浓度的测定.pptVIP

实验目的 1. 掌握血清葡萄糖浓度测定方法(GOD-POD法)。 2. 了解口服葡萄糖耐量试验(OGTT)的测定方法与临床意义。 血糖测定方法 实验原理 （一）无机化学法：Folin-Wu法基于葡萄糖醛基的还原性 （二）有机化学法：邻甲苯胺法、联苯胺法等 Cu2+ OH- Cu+ Glu 磷钼酸 显色 葡萄糖在酸性条件下加热可脱水生成5-羟甲基-2-呋喃甲醛，后者与邻甲苯胺缩合成青色的Schiff碱。Schiff碱的颜色深浅与样品中葡萄糖的含量成正比。 评价：操作简便，特异性较高。 Schiff碱 (青色) 单酶反应法：A B 直接测定底物的含量，由酶的变化量来测定底物量 酶偶联反应法：A B C 常以脱氢酶或者过氧化物酶作指示酶 1. 己糖激酶法 (Hexokinase, HK) 葡萄糖 + ATP　 葡萄糖-6-磷酸 + ADP 葡萄糖-6-磷酸 + NADP+ 6-磷酸葡萄糖酸内酯 + NADPH HK 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 NADPH在340 nm有吸收峰，其吸光度增加与标本中的葡萄糖浓度成正比。本法特异性高，灵敏度高，干扰因素少，为葡萄糖测定参考方法，但试剂较贵。 （三）酶法 葡萄糖氧化酶GOD (glucose oxidase) 将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。过氧化物酶POD (peroxidase)将过氧化氢分解为水和氧，并将无色的4-氨基安替比林与酚氧化缩合生成红色的醌类化合物(Trinder反应)，其红色深浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比。 2. 葡萄糖氧化酶法(GOD-POD法) ?空腹血糖损害IFG (impaired fasting glucose) 和糖耐量减退IGT (impaired glucose tolerance) 是正常向糖尿病的过渡状态，这部分人虽然现在还不是糖尿病， 但是将来发生2型糖尿病的危险性非常高，可以说是糖尿病的后备军。据有关研究报道，每年5-8%的 IGT者将发展成为2型糖尿病。 妊娠糖尿病GDM (Gestational diabetes mellitus) 一般在妊娠后期(孕期的第28周左右)发生，占妊娠妇女的2-3%。发病与妊娠期进食过多以及胎盘分泌的激素抵抗胰岛素的作用有关。大部分病人分娩后可恢复正常。 口服葡萄糖耐量试验OGTT (Oral glucose tolerance test) OGTT为口服葡萄糖负荷试验，可了解人体进食葡萄糖后的血糖调节能力，早期发现糖代谢异常，早期诊断糖尿病，是一种简单、快捷的诊断方法。 OGTT重复性差，操作繁琐，并非必需的糖尿病诊断方法，因此不推荐临床常规应用。 人体对糖的耐受现象 方法：试验前三天，受试者每日食物中糖含量不应低于150 g，且维持正常活动。影响试验的药物应在三天前停用，受试前应空腹10-16 h。空腹取血后，5分钟内饮入250 mL含75 g无水葡萄糖的糖水(妊娠妇女用量为100 g，儿童按1.75 g/kg体重给予，不超过75 g)。服糖后半小时、l小时、2小时、3小时各抽血一次，定量测定血糖。采血同时每隔1小时取尿液作尿糖试验。整个过程不可吸烟、喝咖啡、喝茶或进食。 糖耐量正常: 空腹血糖 ≤ 6.1 mmol/L； 服糖30-60 min达峰值,但一般＜10 mmol/L 服糖2h后恢复至空腹血糖水平, 即＜7.8 mmol/L 尿糖(-) mmol/L 空腹血糖(mmol/L) 服糖2h后血糖(mmol/L) 正常 ≤6.1 ＜7.8 糖尿病性糖耐量 ≥7.0 ＞11.1 空腹血糖损害 6.1-7.0 ＜7.8 糖耐量减退 ＜7.0 7.8-11.1 实验器材和试剂 实验器材 试管、微量可调式移液器、721E分光光度计、水浴锅 试剂 1. 血清 2. 试剂1(R1): 磷酸盐缓冲液、4-氨基安替比林、苯酚 3. 试剂2(R2): GOD、POD 4. 工作试剂：试剂1和试剂2按照10:1混合 5. 葡萄糖标准溶液(5.55 mmol/L)