细胞生物学方法案例.ppt

带有冠细胞的人类卵子。这张彩色图片上的紫色人类卵子坐落在一个柱状物上。它上面包裹一层透明带状物——醣蛋白，这种物质既具有保护卵细胞的作用，又能诱捕和限制精子。两个红色冠细胞粘贴在透明带状物上。 大量精子正在争先恐后地给卵子受精 6天后的人类胚胎被植入子宫 从视神经中伸出的血管。这张照片显示的是血管从黑色视盘中伸出。视盘是个盲点，因为视网膜的这个区域没有光感细胞，视神经和视网膜血管从眼睛后面的这个部位伸出去。 耳毛细胞的主要功能是发现对声震作出反应时产生的机械运动 肺气泡 肺癌细胞。这张异常的肺癌细胞图与上面的健康肺部图片形成鲜明对比 红血球/舌头上的味蕾 普尔基涅神经元/头发分叉 血液凝块位于中间的那个细胞是白血球 小肠绒毛 第一节 细胞形态结构的观察方法 第二节 细胞组分的分析方法 第三节 细胞培养、细胞工程与显微操作技术 数值孔径N.A（ n .sin ? ） ■ 倒置显微镜（inverse microscope ） ?特点： 物镜与照明系统的位置颠倒，前者置于载物台之下，而后者在载物台的上方。集光器与载物台之间的工作距离提高， 可以放置培养皿、培养瓶等容器， 直接对培养的细胞进行照明和观察。 ?倒置显微镜应用： 用于观察培养的活细胞，通常具有相差物镜，有的还具有荧光装置。 ■激光共聚焦扫描显微镜技术（ Laser confocal scanning microscope, LCSM ）?特点： 在物镜的成像面上加一个针孔，只有焦平面发出的光才能通过该针孔，离焦的光不能通过。也就是看不到非焦点的物体，偏离焦点的无用荧光就被排除在图像之外。 效果使观察到的图像反差和分辨率提高。 ?原理： 用激光作为荧光的激发光，通过扫描装置对样品进行扫描可获得二维荧光图像；上下调节物镜就可以获得细胞不同切面二维荧光图像；通过三维重建计算机软件进行图像处理得到样品的三维结构。 ?用途： 类似荧光显微镜，但能扫描不同层次，形成立体图像，图像清晰，分辨率高。 共焦点激光扫描显微镜技术（LSCM） 用激光作为荧光的激发光，用光阑使只有焦面的像通过，得到光切片的效果，可重建细胞的三维影象。 右图：核蓝色，微管绿色 血细胞 一些电镜图片 Paraffin section of thymus from mouse treated with dexamethasone and stained with anti-cleaved caspase 3 antibody green , and anti-ssDNA antibody red . Confocal microscopy demonstrates doubly stained thymic cells arrowheads . Note that the cleaved caspase 3 is localized to the cytoplasm, whereas the ssDNA is localized to the nucleus. Some cells only stained by cleaved caspase 3 antibody are indicated by solid arrows. The nucleus is labeled with DAPI blu Paraffin section of thymus from mouse treated with dexamethasone and stained with anti-cleaved caspase 3 antibody red . Confocal microscopy image shows intensely stained cells in the cortex, with neighboring unstained cells. Nuclei have been stained with DAPI blue . This represents a good positive control for the anti-cleaved caspase 3 antibody technique 扫描隧道显微镜图片 扫描隧道显微镜及原理 ? 基本操作过程 将样品置于液氮或费利昂中超低温冰冻； 再将冷冻的样品装在预冷的样品台上, 用冷刀将样品骤然断开； 升温,当温度上升后，冰在真空条件下迅速升华，断裂面上的结构暴露出来（蚀刻）； 再喷涂上一层蒸气碳和铂； 将组织溶解掉，把喷涂上的碳和铂的膜剥离下来（复膜）； 电镜观察。 ?原理： 当探针和样品之间的距离近到几个nm以内时，探针尖端分子的电子云和样品表面的电子云互相重叠，这时加上适当的电压（一般2mV