理论篇第五植物组织培养案例.ppt

植物组织培养 1、概念和意义 2、植物分生组织培养 3、植物愈伤组织培养 4、其他组织培养 植物组织培养的概念和意义 植物组织培养的概念有广义和狭义之分，本章所涉及的植物组织培养是狭义的组织培养，是指对植物组织，包括分生组织、形成层、木质部、韧皮部、表皮、皮层组织、薄壁组织、髓部等及其培养产生的愈伤组织进行离体培养的技术。 通过组织培养可以对不同类型组织的起源、形态发生、器官发生、植物再生等进行研究。 2.1植物分生组织培养的概念及意义 植物分生组织培养（meristem culuture）：指对植物体的分生组织进行离体培养。分生组织包括茎尖分生组织（应用最多）、居间分生组织和侧生分生组织。 分生组织细胞具有持久的分裂能力和很强的生命力，离体培养时易发生细胞分化，再生完整植株，并且幼嫩的分生组织没有输导组织，病毒难以侵入，有利于获得无病毒植株。 例：近年来应用类似Morel的方法成功将66属以上的兰属植物纳入了试管繁殖体系。 2.2.1茎尖分生组织培养的方法 （1）芽的表面消毒：健壮枝梢 去除叶片 分成1-2cm 自来水冲洗 消毒 95%的酒精30秒 0.1%升汞或0.5%次氯酸钠消毒8-10min 无菌水冲洗3~4次 注：植物不同，消毒方法也有一定的差异。如块根或块茎类植物，可先用漂白粉的饱和溶液浸泡块根或块茎15分钟，然后使它们在无菌条件下萌发，再取芽使用。鳞茎类植物，先剥去外部的鳞叶，用70%的酒精消毒鳞茎表面，然后在超净工作台上用消过毒的解剖工具取出位于鳞茎中心的休眠芽，直接接种到培养基上。 2.2.1茎尖分生组织培养的方法 （2）茎尖的分离与接种：材料置解剖镜下，解剖刀切取小于1mm带有1～2个叶原基的茎尖，接种到培养基上. 注： 解剖时必须防止茎尖变干，因此茎尖暴露的时间越短越好 解剖针要常常蘸入70%酒精，并用火焰灼烧以进行消毒，冷却后使用 解剖镜台应垫载玻片或培养皿，并注意其与手的消毒 2.2.1茎尖分生组织培养的方法 （3）腋芽的生长与增殖：在合适的培养基上培养，1~3个月后可以形成小的植株，有的会长出愈伤组织，再分化长出不定芽，经增殖培养扩大繁殖。 注： 茎尖培养主要是通过腋芽增殖扩大芽的群体，达到快速繁殖的目的 可用细胞分裂素打破顶端优势，促使腋芽萌动 当培养基中含细胞分裂素时离体芽可形成丛生芽或丛生枝 2.2.1茎尖分生组织培养的方法 （4）茎尖接种后的生长及调节： 生长正常：生长点延长，基本无愈伤组织形成 生长停止：接种物不增大，渐变褐色，至枯死，原因多为剥离过程中茎尖受伤 生长缓慢：接种物增大缓慢，渐转绿，成一绿点，此时应立即转入高浓度生长素培养基，并适当提高培养温度 生长过速：生长点不伸长或略伸长，并形成大量疏松愈伤组织，需转入无激素培养基或降低培养温度 （5）诱根与移栽：与一般培养器官相同 2.3影响分生组织培养的因素 2.3.1培养基 通常以White、Morel和MS作为分生组织培养的基础培养基。使用时应注意以下4点： 提高培养基钾盐和铵盐的含量有利于茎尖生长 培养基可含有0.1~0.5mg/L的生长素和细胞分裂素，同时应避免使用2，4-D 一般使用0.8％琼脂固化培养基 培养基的pH值应控制在5.6~5.8之间 2.3影响分生组织培养的因素 2.3.2外植体的大小 外植体的大小与其存活率、褐化率和玻璃化均有关。外植体大，感染率高，过小，存活率低；叶原基的存在与否也影响分生组织形成植株的能力。 2.3影响分生组织培养的因素 2.3.3培养条件 包括温度、湿度和光照。 温度的设定主要由植物的种类、起源和生态类型决定，一般采用标准的培养室温度（ 25+2）℃ 培养室的湿度应保持较低的状态，以免室内生长霉菌 植物光照培养的效果通常比暗培养效果好，光照强度为1000~2000LX，每天16h照明或24h连续光照。 2.3.4外植体的生理状态 最好取活跃生长且处于萌动期的芽上的茎尖 3、植物愈伤组织培养 愈伤组织培养(callus culture)：是指将外植体接种到人工培养基上，在激素作用下，进行愈伤组织诱导、生长和分化的培养过程。 3.1愈伤组织培养的基本过程 3.1.1愈伤组织形成的条件 3.1.2愈伤组织的形成过程 3.1.3愈伤组织的生长 3.1.4愈伤组织的形态发生 3.1.4影响愈伤组织培养的因素 3.1.1愈伤组织形成的条件 愈伤组织形成需要离体和外源激素两大条件。 在生理和遗传的制约下，细胞的全能性不能表达而发育成完整植株，只有离开这种制约，才有可能表达出全能性。 诱导愈伤组织常用的激素有2,4-D、NAA、IAA、KT