果树枝条可溶性糖的测定.docVIP

果树枝条可溶性糖的测定 一、实验目的： 掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。学习植物可溶性糖的一种提取方法。 二、实验原理 糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮 C14H10O 脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。该物质在620 nm处有最大吸收，在150 μg/ml范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。这一方法有很高的灵敏度，糖含量在30 μg左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。 三、仪器、试剂和材料 1.仪器：电热恒温水浴锅，分光光度计，电子天平，容量瓶，刻度吸管等 2.试剂： 1 葡萄糖标准液：l00 μg/ml 2 浓硫酸 3 蒽酮试剂：0.2 g蒽酮溶于100 ml浓 H2SO4中。当日配制使用。 3.材料：淀粉 四、操作步骤 1.葡萄糖标准曲线的制作 取7支试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液： 管号 1 2 3 4 5 6 7 葡萄糖标准液（ml） 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 蒸馏水（ml） 0.9 0.8 0.7 0.6 0.4 0.2 葡萄糖含量（μg） 10 20 30 40 60 80 在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0m1，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖，以防蒸发。自水浴重新煮沸起，准确煮沸l0 min取出，用冰浴冷却至室温，在620 nm波长下以第一管为空白，迅速测其余各管吸光值。以标准葡萄糖含量（μg）（μg））───────────── × 100 W × V测 × 106 其中：C——在标准曲线上查出的糖含量（μg）总体积（ml）测定时取用体积（ml）D——稀释倍数W——样品重量（g）106——样品重量单位由g换算成μg的倍数