hepaCAM基因对结肠癌细胞增殖和周期的影响.docVIP

hepaCAM基因对结肠癌细胞增殖和周期的影响 　　摘要：目的：研究hepaCAM基因对结肠癌细胞Colo205增殖和周期的影响。方法：用腺病毒向结肠癌细胞Colo205导入肝细胞黏附分子（Hepa-tocytecelladhesionmolecule，hepaCAM），以RT-qPCR及westernblot检测hepaCAMmRNA及蛋白水平，MTT测细胞生存率，FCM测细胞周期及凋亡。结果：RT-qPCR及westernblot显示：hepaCAM基因在结肠癌细胞Colo205中呈现低表达状态，向细胞导入hepaCAM基因后，MTT显示：实验组生存率显著降低（Plt;0.01）。FCM证实：实验组出现明显G2/M期阻滞，但细胞凋亡尚未到达统计学意义。结论：hepaCAM基因可显著抑制人类结肠癌Colo205细胞的增殖，并将细胞阻滞于G2/M期，从而产生抗肿瘤作用。 　　关键词：结肠癌;肝细胞黏附分子;抑制率;细胞周期 　　中国图书分类法分类号： 　　文献标志码： 　　收稿日期： 　　AbstracT：Objective：Toinvestigatethebiologicaleffectsofhepa-tocytecelladhesionmolecule 　　macellColo205.Methods：AfterinfectedwithadenoviruspAdH5-hepaCAMorpAdH5， 　　sofhepaCAM，MTTassaywasusedtoobservethesurvivalratesofcellsindifferentgroups，FCMwasusedtoanalyzethechangesofcellcycleandapoptosisinColo205.Results：PCRandwesternblotshowedthatmRNAandproteinlevelsofhepaCAMweredown-regulatedinColo205.AfterinfectedwithadenoviruspAdH5-hepaCAM，expressionlevelofhepaCAMwasup-regulateddramatically.MTTassayshowedthatthesurvivalratewasmarkedlydecreased 　　2/MphasearrestwasseeninpAdH5-hepaCAMgroup.Conclusion：AfterintroductionofhepaCAMgene， 　　ndG2/Mphasearrestcanbeobserved，whichmightbethereasonoftumorsuppressionbyhepaCAMinhumancoloncarcinomacell. 　　Keywords：carcinomaofcolon;hepa-tocytecelladhesionmolecule;inhibitionrate;cellcycle 　　结肠癌是消化系统中最常见的恶性肿瘤之一，近年来，我国结肠癌的发病率有明显增高的趋势。由于结肠癌常起病隐匿，许多患者获得诊断时肿瘤已出现了不同程度的扩散与转移[1，2]。尽管各种治疗决策不断改进，但结肠癌的治疗仍然是一大挑战[1]。基因突变已经被确认为癌症发生的重要标志，因此，开展结肠癌基因治疗研究具有重大意义。ShaliS[3]等研究发现肝细胞黏附分子（hepa-tocytecelladhesionmolecule，hepaCAM）是一种免疫球蛋白类细胞黏附分子，它具有抑制肿瘤生长及增殖的作用。它在乳腺癌、肾癌、膀胱癌等多种肿瘤组织中表达水平明显下降，上调其表达可显示出显著的肿瘤抑制效应[4-7]。而hepaCAM在结肠癌中的研究目前尚存在空白。本研究将检测hepaCAM基因在结肠癌细胞Colo205中的表达水平，并将外源性hepaCAM基因导入Colo205细胞，观察其对肿瘤细胞增殖与周期的影响，为结肠癌的基因治疗探索新的思路。 　　1材料与方法 　　1.1材料 　　腺病毒pAdH5-hepaCAM、空载腺病毒pAdH5及结肠癌细胞系Colo205由本室保存。Trizol、逆转录试剂盒、SYBRGreenⅡ荧光定量PCR试剂盒及DNAmarker购自宝生物工程（大连）有限公司，引物由Invitrogen公司合成。MTT、胰酶、二甲基亚砜购自Sigma公司。hepaCAM抗体购自LifespanBiosciences公司。β-actin抗体购自SantaCruz公司。 　　1.2方法 　　1.2.1细胞培养及腺病毒感染。待Colo205细胞复苏后，置于含10%小牛血清的RPMI-1640培养液