HPLC测定天麻成分对甲氧基苄醇在大鼠血液中的药代动力学参数.docVIP

HPLC测定天麻成分对甲氧基苄醇在大鼠血液中的药代动力学参数 　　摘要：目的 采用高效液相色谱法（HPLC）测定天麻成分对甲氧基苄醇在大鼠血液中的药代动力学参数。方法 采用灌胃和静脉注射2种方式给药，HPLC测定不同时间大鼠血液中天麻成分对甲氧基苄醇的浓度，DAS3.0软件计算药代动力学参数。结果 大鼠血液中对甲氧基苄醇在0.63～321.17 μg/mL浓度范围内线性关系良好，r2=0.994 5；日内、日间精密度、绝对回收率和稳定性均在规定范围内。结论 本方法操作简便，能较准确地测出天麻成分对甲氧基苄醇在大鼠血液中的药代动力学参数。 　　关键词：高效液相色谱法；对甲氧基苄醇；药代动力学；大鼠 　　中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2015）06-0099-04 　　目前对于天麻的药代动力学研究大多以天麻素为主[1-2]。药代动力学对于指导临床安全合理用药及新药研发都具有重要意义[3]。本课题组前期研究发现天麻成分对甲氧基苄醇具有较好的脑保护作用，因此，本研究采用高效液相色谱法（HPLC）测定其在大鼠血液中的药代动力学参数，为后续研究提供依据。 　　1 动物、仪器与试药 　　SD大鼠，清洁级，雄性，10周龄，体质量220～250 g，四川省医学科学研究院动物研究所提供，动物合格证号SCXK（川）2008-24。 　　反相高效液相色谱仪，UltiMate3000；TC-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），美国Agilent；离心机， HITACHI；旋涡混合器XW-80A，上海精科实业有限公司。 　　对甲氧基苄醇，25 g，北京百灵威科技有限公司，批号134868。HPLC级甲醇，美国Spectrum；HPLC级乙腈，美国Spectrum；娃哈哈纯净水。 　　2 方法与结果 　　2.1 不同给药方式的样品处理 　　2.1.1 静脉注射 精密称取0.125 0 g对甲氧基苄醇于25 mL容量瓶中，用10%乙醇定容，0.45 μm孔径膜过滤备用。将大鼠用10%水合氯醛麻醉（0.3 mL/100 g），固定于鼠板，剪开颈部皮肤，钝性分离找到颈动脉，小心剥离迷走神经，远心端手术线结扎颈动脉，近心端用止血夹夹住，在手术线和止血夹之间的颈动脉血管上剪出小口，插入塑料细管，手术线结扎细管与血管贴壁处。在不同时间点松开止血夹即可取血。尾静脉注射给药量为50 mg/kg。分别于给药后2、4、6、8、10、12、20、30、45 min取血0.3 mL，6000 r/min离心10 min，取血浆0.1 mL，加入0.5 mL乙腈沉淀蛋白，涡旋3 min，10 000 r/min离心10 min，取上清液氮气吹干，加入流动相0.4 mL，涡旋3 min，10 000 r/min离心10 min，装入含内存管进样品，HPLC进样自动检测。 　　2.1.2 灌胃 精密称取1.600 1 g对甲氧基苄醇于25 mL烧杯中，加入20 mL水，加入0.100 2 g羧甲基纤维素钠（即0.5%浓度），充分搅拌混匀备用。口服给药量为800 mg/kg。大鼠灌胃相应药物后用10%水合氯醛0.3 mL/100 g麻醉，固定于鼠板，剪开颈部皮肤，钝性分离找到颈动脉，小心剥离迷走神经，远心端手术线结扎颈动脉，近心端用止血夹夹住，在手术线和止血夹之间的颈动脉血管上剪出小口，插入塑料细管，手术线结扎细管与血管贴壁处。在不同时间点松开止血夹即可取血。分别于给药后10、13、16、19、22、25、30、45、60 min取血0.3 mL，6000 r/min离心10 min，取血浆0.1 mL，加入0.5 mL乙腈沉淀蛋白，涡旋3 min，10 000 r/min离心10 min，取上清液氮气吹干，加入流动相0.4 mL，涡旋3 min，10 000 r/min离心10 min，装入含内存管进样品，HPLC进样自动检测。 　　2.2 测定方法的建立 　　2.2.1 色谱条件 TC-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm， 5 μm），流动相为甲醇-水（35∶65），流速0.3 mL/min，柱温25 ℃，进样量20 μL，检测波长278 nm，目标峰与杂质峰能有效分离，两者分离度1.5，符合要求。对甲氧基苄醇的保留时间在9.7 min左右。色谱图见图1。 　　2.2.2 标准曲线的绘制 精密称取192.70 mg对甲氧基苄醇于250 mL容量瓶中，乙腈定容，作为母液。制备浓度为321.17、160.59、80.29、40.15、20.07、10.04、5.02、2.51、1.25、0.63 μg/mL的含药血样，制作标准曲线，计算得回归方程Y=0.0663X-0.2181（r2=